Kỷ nguyên mới cho PP chống ung thư bằng chính hệ miễn dịch 1

Kỷ nguyên mới cho PP chống ung thư bằng chính hệ miễn dịch

Các con đường và mạng lưới gen làm trung gian cho các tác động điều tiết của cannabidiol, một cannabinoid không hoạt tính, trong tế bào T tự miễn dịch Ewa Kozela , Ana Juknat , Fuying Gao , Nathali Kaushansky , Giovanni Coppola ,và Zvi Vogel Thông tin tác giả Ghi chú bài viết Thông tin bản quyền và giấy phép Tuyên bố từ chối trách nhiệm Bài báo này đã được trích dẫn bởi các bài báo khác trong PMC. Dữ liệu liên kết Tuyên bố về tính sẵn có của dữ liệu Đi đến: trừu tượng Lý lịch Các nghiên cứu trước đây của chúng tôi cho thấy rằng cannabinoid không có tác dụng thần kinh, cannabidiol (CBD), cải thiện các triệu chứng lâm sàng trong myelin chuột oligodendrocyte glycoprotein (MOG) 35-55 gây ra mô hình viêm não tự miễn thực nghiệm của bệnh đa xơ cứng (MS) cũng như giảm trí nhớ MOG35 Tăng sinh -55 tế bào T đặc hiệu (T MOG ) và tiết cytokine bao gồm IL-17, một yếu tố...

Các con đường và mạng lưới gen làm trung gian cho các tác động điều tiết của cannabidiol, một cannabinoid không hoạt tính, trong tế bào T tự miễn dịch

Ewa Kozela ,Đồng tác giả Ana Juknat , Fuying Gao , Nathali Kaushansky , Giovanni Coppola ,và Zvi Vogel
Thông tin tác giả Ghi chú bài viết Thông tin bản quyền và giấy phép Tuyên bố từ chối trách nhiệm
Bài báo này đã được trích dẫn bởi các bài báo khác trong PMC.

Dữ liệu liên kết

Tuyên bố về tính sẵn có của dữ liệu
Đi đến:

trừu tượng

Lý lịch

Các nghiên cứu trước đây của chúng tôi cho thấy rằng cannabinoid không có tác dụng thần kinh, cannabidiol (CBD), cải thiện các triệu chứng lâm sàng trong myelin chuột oligodendrocyte glycoprotein (MOG) 35-55 gây ra mô hình viêm não tự miễn thực nghiệm của bệnh đa xơ cứng (MS) cũng như giảm trí nhớ MOG35 Tăng sinh -55 tế bào T đặc hiệu (T MOG ) và tiết cytokine bao gồm IL-17, một yếu tố tự miễn dịch chính. Cơ chế của các hoạt động này hiện chưa được hiểu rõ.

Phương pháp

Trong tài liệu này, bằng cách sử dụng cấu hình biểu hiện gen dựa trên microarray, chúng tôi mô tả mạng lưới gen và các con đường nội bào liên quan đến sự ức chế do CBD gây ra đối với các tế bào T MOG bộ nhớ được kích hoạt này . Các tế bào MOG T gây não được kích thích với MOG35-55 khi có mặt các tế bào trình diện kháng nguyên có nguồn gốc từ lá lách (APC) có hoặc không có CBD. mRNA của T MOG tinh khiết sau đó được phân tích vi mô Illumina, tiếp theo là phân tích con đường khéo léo (IPA), phân tích mạng đồng biểu hiện gen có trọng số (WGCNA) và bản thể học gen (GO) để làm sáng tỏ các tương tác gen. Kết quả đã được xác nhận bằng cách sử dụng các xét nghiệm qPCR và ELISA.

Các kết quả

Hồ sơ gen cho thấy rằng phương pháp điều trị CBD ngăn chặn sự phiên mã của một số lượng lớn các gen tiền viêm trong T MOG được kích hoạt . Chúng bao gồm các cytokine ( Xcl1, Il3 , Il12a, Il1b ), thụ thể cytokine ( Cxcr1 , Ifngr1 ), các yếu tố phiên mã ( Ier3, Atf3, Nr4a3, Crem ) và các phân tử tín hiệu siêu họ TNF ( Tnfsf11 , Tnfsf14 , Tnfrsf18 , Tnfrsf18 ). “Sự khác biệt IL-17 ” và “ Tín hiệu IL-6 và IL-10 ” được xác định trong số các quá trình hàng đầu bị ảnh hưởng bởi CBD. CBD làm tăng một số bảng điểm phụ thuộc IFN (Rgs16, Mx2 , Rsad2 , Irf4 , Ifit2 , Ephx1 , Ets2 ) được biết là thực hiện các hoạt động chống tăng sinh trong tế bào T. Thật thú vị, một số bản sao được điều chỉnh theo MOG35-55 nhất định được duy trì ở mức cao khi có CBD, bao gồm các yếu tố phiên mã ( Egr2 , Egr1 , Tbx21 ), cytokine ( Csf2 , Tnf , Ifng ) và chemokine ( Ccl3 , Ccl4 , Cxcl10 ) gợi ý rằng CBD có thể thúc đẩy cạn kiệt bộ nhớ T MOGtế bào. Ngoài ra, CBD tăng cường phiên mã của các phân tử đồng ức chế tế bào T ( Btla , Lag3 , Trat1 , và CD69 ) được biết là can thiệp vào tương tác T / APC. Hơn nữa, CBD tăng cường sự phiên mã của các chất điều biến stress oxy hóa với hoạt tính chống viêm mạnh được kiểm soát bởi Nfe2l2 / Nrf2 ( Mt1 , Mt2a , Slc30a1 , Hmox1 ).

Kết luận

Hồ sơ biểu hiện gen dựa trên microarray đã chứng minh rằng CBD phát huy tác dụng điều hòa miễn dịch của nó trong các tế bào T MOG trong bộ nhớ được kích hoạt thông qua (a) ức chế phiên mã liên quan đến Th17 tiền viêm, (b) bằng cách thúc đẩy sự kiệt sức / dung nạp của tế bào T, (c) tăng cường khả năng chống phụ thuộc IFN chương trình tăng sinh, (d) cản trở sự trình bày kháng nguyên, và (d) tạo ra chất chống oxy hóa giải quyết tình trạng viêm. Những phát hiện này đưa ra cơ chế mà CBD phát huy tác dụng chống viêm cũng như giải thích vai trò có lợi của CBD trong các tế bào T bộ nhớ bệnh lý và trong các bệnh tự miễn dịch.

Tài liệu bổ sung điện tử

Phiên bản trực tuyến của bài viết này (doi: 10.1186 / s12974-016-0603-x) có chứa tài liệu bổ sung dành cho người dùng được ủy quyền.

Từ khóa: Tự miễn dịch, Tế bào T bộ nhớ, Biểu hiện gen, Cannabidiol
Đi đến:

Lý lịch

Các cannabinoid tự nhiên ( có nguồn gốc từ Cần sa ), tổng hợp và nội sinh đã được chứng minh là có tác dụng chống viêm mạnh mẽ trong các mô hình viêm khác nhau (được [ 1 , 2 ] xem xét ), bao gồm tự miễn dịch qua trung gian tế bào T. [ 3 ]. Tuy nhiên, hầu hết các thí nghiệm đều tập trung vào tác động của THC, thành phần chính của Cần sa tác động tâm thần và trên các phối tử giống THC tương tác với các thụ thể cannabinoid CB1 (chủ yếu biểu hiện trên tế bào thần kinh) hoặc thụ thể CB2 (có nhiều trên các tế bào miễn dịch). Một phytocannabinoid khác, cannabidiol (CBD) gần đây đã được quan tâm nhiều như một hợp chất điều hòa miễn dịch mạnh [ 4]. CBD có ái lực rất yếu đối với các thụ thể cannabinoid CB1 và CB2 và do đó thiếu hoạt động tâm thần qua trung gian CB1 [ 5 ]. Hơn nữa, CBD được chứng minh là có độc tính rất thấp khi kiểm tra trên người [ 6 ].

Thật vậy, CBD đã được quan sát để gây ra tác dụng chống viêm ở các mô hình động vật bị viêm khớp do collagen qua trung gian tế bào T [ 7 ], bệnh tiểu đường tự miễn [ 8 ] và viêm gan tự miễn [ 9 ]. Gần đây, chúng tôi đã báo cáo rằng CBD đã quản lý các triệu chứng lâm sàng cải thiện hệ thống ở chuột myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) 35-55 gây ra mô hình viêm não tự miễn thực nghiệm (EAE) của bệnh đa xơ cứng (MS), một bệnh tự miễn thoái hóa thần kinh dẫn đến tê liệt tiến triển và bắt đầu bởi tế bào T tự hoạt động nhắm mục tiêu đến vỏ myelin [ 10 , 11 ]. Chúng tôi đã chỉ ra rằng CBD làm giảm thâm nhập miễn dịch thần kinh trung ương, kích hoạt vi tế bào và tổn thương trục ở những con chuột EAE này [ 12]. Các quan sát của chúng tôi đã được các nhóm khác xác nhận [ 13 – 15 ]. Cơ chế của các hoạt động CBD điều tiết có lợi này vẫn chưa được hiểu rõ.

Các bệnh lý tự miễn dịch, bao gồm MS / EAE, được thúc đẩy bởi các tập hợp con tế bào T đã biến đổi được gọi là tế bào T bộ nhớ. Các tế bào T ghi nhớ hoạt động tự động này được bắt mồi giả bởi các tế bào trình diện kháng nguyên (APC) để nhắm mục tiêu các tế bào của chính chúng, dẫn đến thoái hóa mô và phát triển bệnh bao gồm bệnh tiểu đường loại I, viêm khớp dạng thấp và MS. Tế bào T bộ nhớ thể hiện tiềm năng tăng sinh cao để phản ứng với tự kháng nguyên cùng với chức năng tác động gây bệnh cao được kiểm soát bởi các con đường tín hiệu cụ thể [ 16]. Tế bào T bộ nhớ tự miễn dịch (bao gồm cả những tế bào nhắm mục tiêu đến vỏ myelin và dẫn đến sự phát triển MS) tiết ra interleukin (IL) -17 cytokine trong thụ thể mồ côi liên quan đến thụ thể axit retinoic γ-T (RORγt) / đầu dò tín hiệu và chất kích hoạt phiên mã 3 (STAT3) – cách thức phụ thuộc và được xác định là kiểu hình Th17 tự miễn dịch [ 17 – 19 ]. Việc chuyển giao thông qua các dòng tế bào T gây não như vậy sang động vật khỏe mạnh dẫn đến các triệu chứng giống MS nhanh chóng và nghiêm trọng [ 20 , 21 ] và sự kích hoạt lại kháng nguyên của các tế bào T nhớ tuần hoàn, không hoạt động có thể góp phần làm tái phát MS ở các dạng MS tái phát – tái phát [ 22 ]. Việc nhắm mục tiêu trị liệu đối với các tế bào T bộ nhớ này dường như rất khó mặc dù chiến lược này đã được chứng minh là hiệu quả [23 ].

Tác động của cannabinoids, bao gồm CBD, đối với các tế bào T bộ nhớ đặc hiệu kháng nguyên này dẫn đến các bệnh lý tự miễn dịch chưa được mô tả rõ ràng và cơ chế của các hoạt động này không được biết đến. Gần đây chúng tôi đã chỉ ra rằng CBD có thể làm giảm chức năng của các tế bào Th17 gây não. Sử dụng dòng tế bào T bộ nhớ đặc hiệu với myelin cao nhận biết biểu mô myelin MOG35-55 (T MOG ), chúng tôi đã chỉ ra rằng CBD làm giảm sản xuất và giải phóng IL-17 từ các tế bào T MOG gây não cũng như IL-6 [ 24 ], một cytokine kiểm soát sự biệt hóa Th17 [ 25 ]. CBD cũng làm giảm quá trình phosphoryl hóa STAT3 [ 26 ], một con đường được biết đến để kiểm soát chức năng giống Th17 của các tế bào MOG bộ nhớ [27 ]. Song song, chúng tôi quan sát thấy CBD thúc đẩy quá trình chống viêm trong các tế bào T bộ nhớ được kích hoạt này bao gồm tăng sản xuất cytokine IL-10 chống viêm và tăng hoạt động của một số yếu tố phiên mã điều hòa bao gồm STAT5 và EGR2 [ 26 ].

Để nghiên cứu các cơ chế phiên mã liên quan đến các hiệu ứng điều hòa miễn dịch CBD, chúng tôi đã lập hồ sơ biểu hiện gen trong tổng số mRNA được phân lập từ các tế bào T MOG hoạt hóa được điều trị bằng CBD sử dụng vi mạch. Các phân tích tin sinh học chi tiết cho phép chúng tôi xác định mạng lưới gen, con đường và các cơ quan điều hòa ngược dòng làm trung gian cho các tác động ức chế CBD. Chúng tôi chỉ ra rằng CBD điều chỉnh giảm quá trình phiên mã của các gen tiền viêm khác nhau kiểm soát chức năng Th17 của tế bào T tạo não trong khi tăng cường chương trình di truyền chống tăng sinh phụ thuộc IFN và tăng cường sự biểu hiện của các gen cản trở sự giao tiếp APC / T và trình bày kháng nguyên. Hơn nữa, một số bản sao chống oxy hóa có tác dụng chống viêm đã được điều chỉnh bởi CBD trong các tế bào T bộ nhớ được kích hoạt.

Đi đến:

Phương pháp

Thuốc thử

Peptide MOG35-55 đông khô [MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK] được mua từ GenScript (Piscataway, NJ, USA) được hoàn nguyên trong PBS vô trùng và dung dịch gốc được bảo quản trong nồi cách thủy ở -20 ° C. CBD (vui lòng lấy từ Giáo sư Raphael Mechoulam, Đại học Hebrew của Jerusalem, Israel) được hòa tan trong ethanol. Liều 5 μM CBD được sử dụng ở đây được lựa chọn dựa trên các nghiên cứu trước đây của chúng tôi, trong đó chúng tôi cho thấy CBD ở nồng độ này ức chế đáng kể sự tăng sinh tế bào T MOG do MOG35-55 gây ra và hoạt động Th17 của chúng, tức là sự biểu hiện và phóng thích IL-17 [ 12 , 24 , 26 ]. Huyết thanh bê thai (FCS) và các thuốc thử nuôi cấy mô khác được lấy từ Công nghiệp sinh học (Kibbutz Beit HaEmek, Israel).

Kích thích T MOG và tinh sạch vi hạt CD4 + từ đồng nuôi cấy APC / T MOG

Dòng tế bào T đặc hiệu MOG35-55 (T MOG ) được duy trì như mô tả trước đây [ 12 , 24 , 26 , 28 ]. APC mới được phân lập từ lá lách của những con chuột đực C57BL / 6 mới 8 tuần tuổi ngay trước khi thí nghiệm. Tế bào lá lách phân ly được mạ (50 × 10 6 tế bào / bản 10 cm) trong môi trường RPMI-1640 có chứa 2,5% FCS, 100 μg / ml streptomycin, 100 U / ml penicillin, 2 mM L-glutamine và 50 μM β-mercaptoethanol . Sau 2 giờ ở 37 ° C trong không khí được làm ẩm 5% CO2 để cho phép APC bám dính, môi trường có các tế bào không kết dính được loại bỏ và các APC kết dính được rửa nhẹ bằng PBS có chứa Ca ++ / Mg ++ và được phủ bằng môi trường mới. Sau đó, 2,5 × 10 6tế bào T MOG được thêm vào và đồng nuôi cấy APC / T MOG được kích thích ngay lập tức với 5 μg / ml MOG35-55 trong 8 giờ khi có hoặc không có CBD ở 5 μM. Thời gian ủ 8 giờ được chọn dựa trên các thí nghiệm đáp ứng thời gian và liều lượng trước đó [ 24 , 26 , 29 ]. CBD đã được thêm vào ngay trước khi bổ sung MOG35-55. Sau 8 giờ ủ, môi trường chứa hầu hết các tế bào T MOG (nhưng không phải tế bào APC kết dính) được thu thập cẩn thận và quay trong 10 phút ở tốc độ 2.000 vòng / phút. Viên tế bào được rửa trong PBS chứa 0,5% BSA và 2 mM EDTA, được ly tâm một lần nữa, và được tiếp tục trong 90 μl dung dịch đệm này. Để cải thiện độ tinh khiết của các tế bào được thu thập, các hạt từ tính CD4 (L3T4) (Miltenyi Biotec GmbH, Bergisch Gladbach, Đức) được thêm vào huyền phù tế bào để chọn lọc dương tính các tế bào CD4 + như đã mô tả trước đó [ 26 , 29 ]. MRNA được phân lập từ các tế bào T MOG tinh khiết được phân tích biểu hiện microarray mRNA toàn cầu, sau đó là phản ứng chuỗi polymerase phiên mã ngược theo thời gian thực định lượng (qPCR) để xác nhận các sản phẩm gen đã chọn.

Tách chiết RNA, phân tích bản sao microarray và xác nhận bằng qPCR

Tế bào T MOG tinh khiết đã được ly giải và được chiết tách RNA ( 5Prime , Darmstadt, Đức) như đã mô tả trước đó [ 26 , 29 , 30 ]. Đối với phân tích microarray so sánh, 200 ng RNA tổng số được khuếch đại, đánh dấu và lai ghép vào Illumina MouseRef-8 v 2.0 Expression Bead-Chip ( Illumina Inc. , San Diego, CA, USA) như đã mô tả trước đó [ 26 , 29]. Dữ liệu thô đã được chuyển đổi log2 và chuẩn hóa bằng cách sử dụng chuẩn hóa lượng tử. Dữ liệu được trình bày trong toàn bộ bản thảo dưới dạng thay đổi gấp trừ khi có quy định khác. Phân tích microarray thống kê và phân tích biểu hiện gen của dữ liệu thô được thực hiện tại Trung tâm Tin học về Di truyền thần kinh và lõi Neurogenomics tại UCLA bằng cách sử dụng tập lệnh R ( www.r-project.org ) và các gói Bioconductor ( http://www.bioconductor.org ; [ 31 ]) như được mô tả [ 32 ] .

Các phân tích về lộ trình và chức năng toàn cầu được thực hiện bằng Phân tích Lộ trình Tài năng của QIAGEN (IPA®, QIAGEN Redwood City CA, USA www.qiagen.com/ingenuity ). Các gen đáp ứng ngưỡng giá trị p là 0,005 cho biểu hiện khác biệt được sử dụng để xây dựng mạng lưới gen bằng các công cụ IPA.

Phân tích mạng đồng biểu hiện gen có trọng số (WGCNA; [ 33 ]) ( http://labs.genetics.ucla.edu/horvath/htdocs/CoexpressionNetwork/) đã được áp dụng để hoàn thành việc xác định đặc điểm chức năng của dữ liệu biểu hiện gen. WGCNA là một phương pháp phân tích công nhận các mạng đồng biểu hiện dựa trên sự chồng chéo cấu trúc liên kết giữa các gen và xem xét mối tương quan của hai gen với nhau và mức độ tương quan được chia sẻ của chúng trong mạng. Tóm lại, các gen hiện diện nhất quán trên các mảng có hệ số hiệp biến cao và kết nối cao đã được chọn để xây dựng mạng và được phân nhóm theo thứ bậc. Các cụm gen (mô-đun) có liên kết cao được xác định dựa trên sự chồng chéo cấu trúc liên kết của chúng bằng cách sử dụng một thuật toán cắt cây động. Các mô-đun như vậy đã được trực quan hóa bằng VisANT ( http://visant.bu.edu). Mẫu biểu hiện gen được cô đọng trong một mô-đun thành “mô-đun eigengene” (ME), là một bản tóm tắt có trọng số về biểu hiện gen trong mô-đun và có thể tương quan với các đặc điểm. Mối quan hệ giữa các gen trong mô-đun có thể được xác định và các phân tích tiếp theo có thể tập trung vào các gen trung tâm (gen có kết nối cao nhất trong mô-đun) và các con đường tương ứng thúc đẩy thay đổi biểu hiện gen mà không có bất kỳ giả định trước nào về chức năng của gen. Ở giai đoạn cuối, các mô-đun quan tâm được chú thích bằng cách sử dụng các danh mục chức năng và sinh học của bản thể gen (GO) bằng công cụ trực tuyến ( http://geneontology.org ). Phương pháp WGCNA đã được sử dụng trong một số lượng lớn các nghiên cứu phiên mã gần đây để tiết lộ mạng lưới gen chức năng [ 34 , 35 ].

phân tích qPCR

Các sản phẩm gen đã chọn được tìm thấy bằng phân tích microarray bị ảnh hưởng bởi CBD đã được xác nhận bởi qPCR như được mô tả [ 26 , 30 ]. CDNA của mỗi gen đã chọn được khuếch đại bằng cách sử dụng một cặp mồi cụ thể được trình bày trong tệp Bổ sung 1 : Bảng S1. Sản phẩm gen β2-microglobulin (β2mg) được sử dụng để bình thường hóa [ 30 ]. Các lần chạy qPCR được lặp lại 3–4 lần bằng cách sử dụng các chế phẩm mRNA từ các thí nghiệm độc lập.

Xét nghiệm ELISA

Xét nghiệm hấp thụ miễn dịch liên kết với enzym (ELISA) đã được thực hiện như đã mô tả trước đó [ 24 ]. Trong thời gian ngắn, các tế bào T MOG được nuôi cấy trong môi trường xét nghiệm trong các đĩa 24 giếng (0,25 × 10 6 tế bào / giếng) cùng với APC lách (5 × 10 6 tế bào / giếng). CBD ở 5 μM được thêm vào các tế bào ngay trước khi bổ sung MOG35-55 ở 5 μg / ml. Sau 24 giờ ủ, môi trường điều hòa tế bào được thu thập, chia nhỏ và phân tích nồng độ IL-1β và IL-3 bằng ELISA ( R&D Systems , Minneapolis, MN, USA). Thời gian ủ trong 24 h được chọn dựa trên các quan sát trước đây của chúng tôi [ 24 ].

Phân tích thống kê dữ liệu qPCR và ELISA

Dữ liệu qPCR và ELISA được biểu thị dưới dạng giá trị trung bình ± SEM của 3–4 thí nghiệm độc lập và được phân tích ý nghĩa thống kê bằng cách sử dụng phân tích phương sai một cách (ANOVA), tiếp theo là bài kiểm tra sau học của Newman-Keul. p  <0,05 được coi là có ý nghĩa. Chương trình Graph Pad Prism (La Jolla, CA, USA) được sử dụng để phân tích thống kê dữ liệu.

Đi đến:

Các kết quả

Hồ sơ biểu hiện gen của các tế bào T MOG hoạt hóa được điều trị bằng CBD

Gần đây chúng tôi đã mô tả hồ sơ biểu hiện gen chi tiết của T MOG được kích hoạt bởi MOG35-55 [ 29 ] và chứng minh tác dụng tiền viêm mạnh mẽ của sự hoạt hóa MOG35-55 ở cấp độ phiên mã xác nhận chức năng Th17 của các tế bào T MOG đã được hoạt hóa [ 24 , 26 ].

Ở đây, chúng tôi đã xem xét tác động của đồng ủ CBD lên cấu hình phiên mã gây ra MOG35-55 của T MOG . Mẫu mRNA được chế biến từ tinh khiết T MOG tế bào (CD4 + lựa chọn tích cực), đồng nuôi trước đó với trước gắn APC, và kích thích với MOG35-55 lúc 5 mg / ml trong 8 h trong sự hiện diện hay vắng mặt của CBD tại 5 μM.

Phân tích microarray dựa trên ngưỡng p  <0,005 cho thấy 2755 bảng điểm (trong khoảng 25.600 mục tiêu hiện diện trên bộ Illumina này ) được điều chỉnh khác biệt giữa các phương pháp điều trị. Trong số này, kích thích với MOG35-55 đã điều chỉnh sự biểu hiện của 842 bản sao gen và 1094 đầu dò gen được điều hòa (Hình. 1a). Việc bổ sung CBD vào các tế bào T MOG được kích thích bằng MOG35-55 đã dẫn đến tổng số 968 bản sao gen điều chỉnh và trong 1330 bản sao điều chỉnh giảm so với mẫu đối chứng (không có CBD và MOG35-55). Trong số này, 81 sản phẩm gen được điều hòa đáng kể ( p  <0,005) bằng cách bổ sung CBD và 82 sản phẩm gen được điều hòa bởi CBD so với mức được quan sát thấy trong các tế bào được kích thích MOG35-55 không có CBD (Hình. 1b). Tế bào T MOG được kích thích bằng MOG35-55 đơn lẻ hoặc được đồng ủ với CBD có chung 627 sản phẩm gen điều hòa và 852 gen điều hòa. Hai mươi tám bản sao được điều hòa và 30 bản sao điều chỉnh giảm trong các tế bào T MOG được ủ với CBD được cung cấp một mình hoặc bằng sự kết hợp CBD + MOG35-55. Chỉ có một sản phẩm gen được điều chỉnh giảm bởi kích thích chỉ MOG35-55 và điều trị chỉ bằng CBD. Điều thú vị là, 13 bảng điểm cá nhân luôn được điều chỉnh và 37 bảng điểm luôn được điều chỉnh giảm trong mọi điều kiện thí nghiệm.

Hình 1

Số lượng bản mã gen bị ảnh hưởng trong các tế bào T MOG được kích thích bằng MOG35-55 khi có hoặc không có CBD. mRNA được chuẩn bị từ tế bào T MOG được đồng nuôi cấy với APC và được kích thích bằng MOG35-55 khi có hoặc không có CBD được phân tích microarray như mô tả trong Phương pháp. Số lượng các bản sao được thể hiện một cách khác biệt được điều chỉnh tăng đáng kể ( màu đỏ ) hoặc điều chỉnh giảm ( màu xanh lá cây ) trong các điều kiện điều trị khác nhau so với các tế bào không được điều trị đối chứng ( p  <0,005). b Biểu đồ Venn minh họa số lượng các bản sao bị ảnh hưởng (điều hòa lên và xuống) bởi các nghiệm thức CBD, MOG35-55 hoặc CBD + MOG35-55 ( tr <0,005) và sự chồng chéo của chúng

Tạo gen bằng phân tích gen

Chỉ các gen đạt tiêu chuẩn p  <0,005 và thay đổi lần lượt là 0,2 (tức là thay đổi 20%) mới được đưa vào phân tích sâu hơn về ảnh hưởng của CBD đối với hoạt động phiên mã của T MOG được kích thích . Một số phương pháp tiếp cận đã được sử dụng để mô tả đặc điểm điều chế CBD của sự hoạt hóa tự kháng nguyên của T MOG . Những điều này bao gồm (1) nhận dạng các bảng điểm ức chế CBD nhất trong các bảng điểm được kích hoạt bởi MOG35-55, (2) nhận dạng các bảng điểm được điều chỉnh MOG35-55 không bị ảnh hưởng bởi CBD, (3) xác định các bảng điểm được điều chỉnh CBD nhiều nhất , và (4) xác định ảnh hưởng của CBD lên các gen điều hòa MOG35-55.

Bàn 1hiển thị các bảng điểm được điều chỉnh bằng cách kích thích với MOG35-55 và giảm đáng kể khi có CBD. Những phiên mã này bao gồm: các cytokine như mRNA Il3 (giảm 72% bởi CBD), Il1b mRNA (giảm 70%), Xcl1 (giảm 49%), và Il12a (24%); mRNA của thụ thể cytokine và chemokine (ví dụ: Ifngr1 là 60%, Cxcr1 là 50%); các yếu tố phiên mã và điều hòa ( Crem 50%, Ier3 31%, Atf3 28%); TNF-các thành viên báo hiệu gia đình ( Tnfrsf18 tăng 40%, Tnfsf11 và Tnfsf14 tăng 30%, Tnfrsf9giảm 21%); các yếu tố tín hiệu bao gồm những yếu tố ảnh hưởng đến độ bám dính ( Amica1 tăng 21%), tăng trưởng ( Igfbp4 tăng 50%), cấu trúc tế bào và vận chuyển ( Vps37b 60%, Tubb2d 50%) cũng như tổng hợp và chuyển hóa lipid / cholesterol ( Dgat1 là 60% , Fdps giảm 50%). Những thay đổi này cho thấy CBD có tác động ngăn chặn sâu sắc các gen được kích hoạt MOG35-55 khác nhau trong tế bào T MOG . Một số bản sao gen đã bị giảm bởi điều trị kết hợp CBD + MOG35-55 (chỉ so với MOG35-55) cũng bị giảm khi ủ với CBD đơn thuần ( so với đối chứng) bao gồm Il1b (70%), Cxcr1(tăng 30%), Ifngr1 (60%), Crem (50%), Tnfrs18 (50%), Igfbp4 (50%), Vps37b (60%), Tubb2b (50%), Fdps ( 50%) và Dgat1 (60%).

Bảng 1

Danh sách các bản sao mà biểu hiện được điều chỉnh bởi kích thích MOG35-55 và điều chỉnh tăng này bị CBD ức chế ( p  <0,005)

Biểu tượng Tên gen Số gia nhập MOG một mình [gấp] $ MOG + CBD [gấp] $ Thay đổi [%] Riêng CBD [gấp] $
Cytokine, chemokine và thụ thể
 Xcl1 Phối tử Chemokine (C motif) 1 NM_008510.1 30.0 15.3 −49% 1,0
 Il3 Interleukin 3 NM_010556.2 25.4 7.2 −72% 1,0
 Cxcl9 Phối tử Chemokine (CXC motif) 9 NM_008599 7.4 5,4 −27% 0,9
 Gpr83 Thụ thể kết hợp với protein G 83 NM_010287 3,9 1,8 −53% 0,9
 Il12a Interleukin 12A NM_008351 2.3 1,5 −24% 0,9
 Cxcr1 Thụ thể chemokine (mô típ CXC) 1 (Il8ra, CD181) NM_178241.1 1,7 0,9 −50% 0,7
 Il1b Interleukin 1, beta NM_008361 1,5 0,5 −70% 0,3
 Ifngr1 Thụ thể gamma interferon 1 NM_10511.1 0,8 0,3 −60% 0,4
Yếu tố phiên mã và chất điều hòa
 Ier3 Phản hồi sớm ngay lập tức 3 NM_133662.1 5.5 3.8 −31% 1,3
 Atf3 Kích hoạt yếu tố phiên mã 3 NM_007498,2 4,7 3,4 −28% 1.1
 Nr4a3 Thụ thể hạt nhân phân họ 4, nhóm A, thành viên 3 NM_015743.1 4.1 3.2 −22% 1,0
 Hỏa táng cAMP bộ điều chế phần tử đáp ứng NM_013498 1,9 0,9 −50% 0,5
TNF-phần tử tín hiệu gia đình
 Tnfsf11 Phối tử yếu tố hoại tử khối u Thành viên siêu họ 11 ( Chất kích hoạt thụ thể của phối tử yếu tố hạt nhân kappa-B (RANKL)) NM_011613.2 11,8 8.2 −31% 0,9
 Tnfsf14 Nhân tố hoại tử khối u phối tử thành viên siêu họ 14 NM_019418.1 5.0 3.5 −30% 1,0
 Tnfrsf9 Siêu họ thụ thể yếu tố hoại tử khối u, thành viên 9 NM_011612.2 4.2 3,3 −21% 0,8
 Tnfrsf18 Siêu họ thụ thể yếu tố hoại tử khối u, thành viên 18 NM_009400.1 1,3 0,7 −40% 0,5
Các yếu tố báo hiệu
 Sphk1 Sphingosine kinase NM_011451 12.3 8.2 −34% 1,0
 Amica1 Phân tử kết dính tương tác với kháng nguyên CXADR NM_001005421.2 5.0 3,9 −21% 1,2
 Axud1 Protein hạt nhân giàu cysteine / serine 1 / Protein apoptosis gây ra TGF-beta 3 NM_153287.2 4.4 3.5 −20% 0,9
 Cdk5r1 Chất hoạt hóa kinase 5 phụ thuộc Cyclin 1 NM_009871,2 3,9 3.1 −20% 0,9
 Igfbp4 Protein liên kết yếu tố tăng trưởng giống insulin 4 NM_010517.2 2.3 1.1 −50% 0,5
 Vps37b Phân loại protein trong không bào 37 chất tương đồng B NM_177876.2 1,5 0,6 −60% 0,4
 Dgat1 Diacylglycerol O-acyltransferase 1 NM_010046.2 1,0 0,4 −60% 0,4
 Tubb2d Tubulin, beta 2b NM_023716.1 0,8 0,5 −50% 0,5
 Fdps Farnesyl diphosphat tổng hợp NM_134469 0,8 0,4 −50% 0,5
Mở trong một cửa sổ riêng

$ Kết quả được trình bày dưới dạng thay đổi lần đầu so với kiểm soát (không có MOG35-55 hoặc CBD). Các con số in nghiêng cho thấy tác động đáng kể của riêng CBD (p <0,005) trong T MOG không được kích thích

Điều quan trọng cần lưu ý (xem Bảng 2) rằng một số bảng điểm tiền viêm được điều chỉnh bằng MOG35-55 không bị ảnh hưởng bởi CBD (được đưa ra khi có mặt MOG35-55). Chúng bao gồm bản sao của một số cytokine (ví dụ: Csf2 , Tnf, Ifng ), chemokine điều chỉnh MOG35-55 (ví dụ, Ccl3 , Ccl4 , Cxcl10 ), glycoprotein điều tiết (ví dụ, Sema7a ), yếu tố phiên mã làm trung gian cho cơ chế dung nạp ( Egr2 , Egr1 ) và một số bộ điều chỉnh phiên mã và tín hiệu liên quan đến IFN (ví dụ: Tbx21 , Ifit3 ).

ban 2

Danh sách các bảng điểm mà biểu hiện được điều chỉnh bởi kích thích MOG35-55 và không bị ảnh hưởng bởi CBD

Biểu tượng Tên gen Số gia nhập MOG một mình [gấp] $ MOG + CBD [gấp] $ Riêng CBD [gấp] $
Cytokine
 Csf2 Yếu tố kích thích khuẩn lạc 2 NM_009969.2 77.0 67.1 1.1
 Tnf Yếu tố hoại tử khối u alpha NM_013693.1 15.3 13,8 1.1
 Ifng Interferon gamma NM_008337.1 10,8 9.5 0,8
Chemokines
 Ccl3 Phối tử Chemokine (CC motif) 3 NM_011337.1 54.1 48,6 0,9
 Ccl4 Phối tử Chemokine (CC motif) 4 NM_013652.1 40,2 37.3 0,9
 Cxcl10 Phối tử Chemokine (CXC motif) 10 NM_021274.1 9.0 9,8 0,9
Glycoprotein
 Sema7a Semaphorin 7A (neo màng GPI) NM_011352.2 4,6 4.3 0,8
Các yếu tố phiên mã
 Egr2 Phản ứng tăng trưởng sớm 2 NM_010118.1 20.1 18,9 1,3
 Egr1 Phản ứng tăng trưởng sớm 1 NM_007913.2 10,7 11,7 1,5
 Tbx21 Hộp chữ T 21 NM_019507.1 2,2 2,5 0,9
Các yếu tố báo hiệu
 Ndrg1 N-myc hạ nguồn quy định 1 NM_010884.1 6.2 6,7 2,5
 Ifit3 Protein do interferon tạo ra với tetratricopeptide lặp lại 3 NM_010501.1 5,6 5,9 0,9
Mở trong một cửa sổ riêng

$ Kết quả được trình bày dưới dạng thay đổi lần đầu so với kiểm soát (không có MOG35-55 hoặc CBD). Các số in nghiêng cho thấy tác động đáng kể của riêng CBD ( p  <0,005)

Các bản sao gen đã được điều chỉnh đáng kể khi có CBD trong các tế bào T MOG được kích thích bằng MOG35-55 được liệt kê trong Bảng 3. Trong số các bản sao này, chúng tôi tìm thấy chủ yếu là các phân tử màng và xuyên màng được biết là điều chỉnh tiêu cực sự hoạt hóa tế bào T, ví dụ, thông qua sự gián đoạn của tương tác APC / T cũng như quá trình xử lý và trình bày kháng nguyên. Chúng bao gồm bảng điểm của Lag3 (tăng 210%), Btla (80%) và CD69 (39%). Hơn nữa, CBD được cho một mình hoặc kết hợp với MOG35-55 đã tăng cường phiên mã Trat1 (một thụ thể tế bào T ức chế CTLA-4 vận chuyển yếu tố nội bào vào màng) tương ứng là 60 và 200%. CBD có tác dụng thúc đẩy đáng kể hoạt động phiên mã của nhiều gen phụ thuộc IFN được biết đến để thực hiện các phản ứng chống tăng sinh do IFN điều khiển, bao gồm cả Mx2MRNA , Irf4 , Ifit2 , Ephx1 , Rsad2 ( Viperin ), Ets2 , Trim30 và Tyki . Ngoài ra, CBD có tác dụng nâng cao một số bản sao liên quan đến hoạt động và tín hiệu GTP, vận chuyển protein và luân chuyển trong các tế bào T như Tagap , Gfod1 , Tnfsf8 ( CD30 ), Nfatc1 , Gbp11 , Ppic , Dusp6 và Slc3a2 ( CD98 ) mARN.

bàn số 3

Danh sách các gen mà quá trình phiên mã được tăng cường bởi CBD trong tế bào T MOG ( p  <0,005)

Biểu tượng Tên gen Số gia nhập MOG một mình [gấp] $ MOG + CBD [gấp] $ Thay đổi [%] Riêng CBD [gấp] $
MOG35-55 được điều chỉnh và tăng cường CBD
Bộ điều chỉnh âm bề mặt
 Lag3 & Gen kích hoạt tế bào bạch huyết 3 NM_008479.1 1,7 5.2 +210% 1,7
 Btla Liên kết với tế bào lympho B và T NM_177584.3 1,8 3.2 +80% 2
 Cd69 Cụm phân biệt 69 XM_132882.1 3,9 5,4 +39% 1,4
Bảng điểm phụ thuộc IFN
 Rsad2 Miền gốc S-adenosyl methionine chứa 2 NM_021384.2 4,9 9.5 +94% 1,6
 Trim30 Mô-típ ba bên chứa 30 NM_009099 2,2 3.1 +40% 1.1
 Mx2 Myxovirus (vi rút cúm) kháng 2 NM_013606 6.0 8.2 +37% 1,0
 Irf4 Yếu tố điều hòa interferon 4 NM_013674.1 4,5 5.3 +18% 1,4
Các yếu tố báo hiệu
 Gbp11 Protein liên kết Guanylate 11 NM_01039647.1 3.2 7 +120% 1.1
 Ppic Peptidylprolyl isomerase C NM_008908.1 1,8 3.2 +80% 1,8
 Tyki Thymidylate kinase thành viên cảm ứng LPS NM_020557.3 4 5,7 +42% 1
 Tagap Kích hoạt tế bào T Protein kích hoạt RhoGTPase NM_145968.1 4,7 6.4 +35% 1,4
 Tnfsf8 Yếu tố hoại tử khối u (phối tử) siêu họ, thành viên 8 NM_009403.2 2,2 2,9 +31% 1.1
 Dusp6 Phosphatase đặc hiệu kép 6 NM_026268.1 3,4 4.3 +26% 1,4
 Gfod1 Miền oxy hóa glucoza-fructoza chứa 1 NM_001033399.1 6.2 7.8 +26% 1,0
 Nfatc1 & Yếu tố hạt nhân của tế bào T hoạt hóa, tế bào chất 1 NM_16791 3,3 4 +21% 1,3
Chỉ CBD được kiểm soát
Chống oxy hóa và chống viêm
 Mt1 Metallothionein 1 NM_013602.2 0,5 2.3 +330% 3
 Slc30a1 Nhóm chất vận chuyển chất rắn 30 (chất vận chuyển kẽm), thành viên 1 NM_009579 0,9 1,8 +100% 1,8
 Mt2 Metallothionein 2 NM_008630.1 1 1,9 +80% 2.3
Các chất điều hòa tiêu cực hoạt động của tế bào T
 Trat1 Bộ tiếp hợp xuyên màng liên kết với thụ thể tế bào T 1 NM_198297 0,7 2.1 +200% 1,6
Bảng điểm phụ thuộc IFN
 Ephx1 Epoxit hydrolase 1 NM_010145.2 0,7 1,8 +170% 2,4
 Ets2 Vi rút nguyên bào hồng cầu V-ets ở gia cầm NM_011809.2 1,3 2,4 +80% 1,3
Các yếu tố báo hiệu
 Ddr1 Thụ thể vùng Discoidin tyrosine kinase 1 NM_007584.1 1.1 3 +170% 2,4
 Pitpnm2 Protein chuyển phosphosphatidylinositol, liên kết với màng 2 NM_011256.1 1,2 2,9 +150% 2,6
 Gpnmb Glycoprotein (xuyên màng) nmb NM_053110.2 0,4 0,9 +90% 2,2
 Asb2 Ankyrin lặp lại và protein chứa hộp SOCS 2 NM_023049.1 0,29 0,52 +79% 1,38
 Slc3a2 Solute nhà cung cấp dịch vụ gia đình 3 thành viên 2 NM_008577,2 1,3 2.3 +70% 1,5
Mở trong một cửa sổ riêng

$ Kết quả được trình bày dưới dạng thay đổi lần đầu so với kiểm soát (không có MOG35-55 hoặc CBD). Các con số in nghiêng chỉ ra ảnh hưởng đáng kể của CBD ( p  <0,005) trong T MOG không được kích thích . & kết quả được báo cáo trước đây [ 25 ]

Một số bản sao bao gồm chất chống oxy hóa và chống viêm cũng như các chất điều hòa âm tính của hoạt động tế bào T đã được CBD tăng lên ngay cả khi chúng không bị ảnh hưởng bởi MOG35-55. Chúng bao gồm chất vận chuyển kẽm Slc30a1 , metallothioneins ( Mt1 và Mt2 ), heme oxygenase ( Hmox1 ), và mRNA của một protein bảo quản cân bằng nội môi lưới nội chất ( Herpud1 ) (Bảng 3, Hình. 2 và Các bác sĩ cho biết:and33).

Tệp bên ngoài chứa hình ảnh, hình minh họa, v.v. Tên đối tượng là 12974_2016_603_Fig2_HTML.jpg
Mở trong một cửa sổ riêng
Hình 2

Các thuật ngữ chức năng làm giàu CBD do IPA xác định trong các tế bào T MOG được kích hoạt . a Các gen hình thành chú thích ” Tăng sinh tế bào lympho T ” được phát hiện là bị ảnh hưởng bởi CBD ( b ). Các gen hình thành chú thích ” Sự khác biệt của tế bào Th17 ” được phát hiện là bị ảnh hưởng bởi CBD. Hướng thay đổi được mã hóa theo màu với màu xanh lá cây ngụ ý điều chỉnh giảm và màu đỏ ngụ ý điều chỉnh tăng. Giá trị log2 thể hiện sự thay đổi do CBD gây ra so với các ô chỉ được kích thích bởi MOG35-55 và giá trị p tương ứng được cung cấp bên dưới mỗi tên bảng điểm. Giải thích các ký hiệu được cung cấp trong Chú giải

Tệp bên ngoài chứa hình ảnh, hình minh họa, v.v. Tên đối tượng là 12974_2016_603_Fig3_HTML.jpg
Mở trong một cửa sổ riêng
Hình 3

Phân tích mạng lưới gen IPA về hiệu ứng CBD trong các tế bào T MOG được kích thích — Mạng 1. Phân tích mạng lưới các gen biểu hiện có ý nghĩa ( p  <0,005) bị ảnh hưởng bởi CBD trong các tế bào T MOG được kích thích bằng MOG35-55 được thực hiện bằng phần mềm IPA như được mô tả trong Phương pháp. Hiển thị mạng lưới, biểu tượng và mối quan hệ sinh học giữa các gen được giải thích trong Hình. 2. Các gen màu xám đã được hiển thị trong tài liệu để tương tác với các sản phẩm gen màu xuất hiện trong sơ đồ

Ở bước cuối cùng, chúng tôi tập trung vào bảng điểm điều chỉnh giảm MOG35-55 và nghiên cứu ảnh hưởng của CBD đối với mức độ của chúng. Bàn 4hiển thị danh sách một số bảng điểm bị ức chế MOG35-55 cao mà không bị ảnh hưởng bởi CBD. Danh sách bao gồm các đại diện của các họ gen và chức năng khác nhau. Điều thú vị là, sự kích hoạt MOG35-55 dẫn đến sự giảm đáng kể trong quá trình phiên mã của một số thụ thể IL-17 ( Il17re , biến thể phiên mã 2 , Il17re biến thể 1 và Il17rc ; xem thêm [ 29 ]) và sự điều hòa giảm này không bị ảnh hưởng bởi sự hiện diện của Khu trung tâm.

Bảng 4

Các gen điều hòa thấp nhất MOG35-55 ( p  <0,005) không bị ảnh hưởng bởi CBD

Biểu tượng Định nghĩa Gia nhập MOG một mình [gấp] $ MOG + CBD [gấp] $ Riêng CBD [gấp] $
Il17re Interleukin 17 thụ thể E, biến thể 2 NM_001034029.1 0,23 0,23 1,04
Sytl2 Synaptotagmin-like 2, biến thể 5 NM_001040088.1 0,25 0,27 1,03
Il17re Interleukin 17 thụ thể E, biến thể 1 NM_145826.2 0,26 0,27 1.11
Tmem176a Protein xuyên màng 176A NM_025326.2 0,28 0,30 1,07
Ian3 Nucleotide liên kết miễn dịch 3 NM_146167,2 0,29 0,23 0,94
Klrd1 Thụ thể giống lectin của tế bào sát thủ, phân họ D, thành viên1 NM_010654.1 0,30 0,29 0,95
Klri2 Họ thụ thể giống lectin của tế bào sát thủ I thành viên 2 NM_177155.2 0,31 0,35 1,01
Sit1 Ức chế cảm ứng bộ chuyển đổi xuyên màng 1 NM_019436.1 0,32 0,29 0,84
Il17rc Interleukin 17 thụ thể C NM_134159.2 0,33 0,36 0,95
Golph2 Protein xuyên màng Golgi loại II NM_027307 0,35 0,35 0,94

$ Kết quả được trình bày dưới dạng thay đổi lần đầu so với kiểm soát (không có MOG35-55 hoặc CBD)

Xác định các mạng chức năng bị ảnh hưởng bởi CBD trong T MOG được kích hoạt

Như đã mô tả ở trên, việc xử lý CBD đối với các tế bào T MOG được xử lý bằng MOG35-55 dẫn đến điều hòa 81 bản sao và điều chỉnh giảm 82 bản sao. Các gen này được tải lên chương trình phân tích IPA để xác định các tập hợp con chức năng, con đường, mạng lưới gen và các cơ quan điều hòa ngược dòng mà CBD nhắm mục tiêu. Nhân vật 2minh họa hai thuật ngữ chức năng GO làm giàu CBD được IPA xác định trong các tế bào MOG T được hoạt hóa , “ Tăng sinh tế bào lympho T ” (Hình. 2a) và “ Sự khác biệt của các tế bào Th17 ” (Hình. 2b). Các “ phổ biến vũ khí của bào lympho T ” chú thích chức năng đã được công nhận bởi IPA được upregulated trong hoạt T MOG là kết quả của CBD đồng ủ bệnh do phiên mã upregulated của Pycard , Ptpn6 , Gfi1 , Hmox1 , Btla , Lag3 , Il21 , Slc3a2 và Vav3 mRNA và do sự triệt tiêu song song của Tg , Dusp10 , Socs3 , Tsc22d3 , Ifngr1 , Tnfsf18 , Cd40 , Il1b ,MRNA Ubash3a và Srf (Hình. 2a). Ngoài ra, trong “ Cách phân biệt TH17 tế bào ” chú thích, IPA phân loại upregulated Il21 , Ptpn6 , Slc3a2 và downregulated Il1b , Socs3 , và Ifngr1 bảng điểm và nhận ra nó bị dập tắt bởi CBD trong kích thích T MOG (Hình. 2b).

Phân tích IPA đã xác định một số con đường kinh điển khác bị ảnh hưởng bởi CBD trong T MOG được kích thích bởi MOG35-55 (Bảng 5). Chúng bao gồm “ tín hiệu IL-10 ” và “ tín hiệu IL-6 ” ( p  <0,005), tiếp theo là “ tín hiệu qua trung gian cAMP ”, “ tín hiệu IGF-1 ”, “ thực bào qua trung gian thụ thể Fcg trong đại thực bào và bạch cầu đơn nhân ”, “ Siêu đường dẫn sinh tổng hợp cholesterol ”và con đường“ biệt hóa tế bào T trợ giúp ”(p <0,05).

Bảng 5

“Con đường chuẩn hàng đầu ” do IPA xác định được làm giàu bằng cách điều trị CBD trong các tế bào T MOG được kích thích

Đường dẫn hợp quy Các gen được chú thích giá trị p
Báo hiệu IL-10 Hmox1 , Il1b , Jun , Socs3 0,0039
Báo hiệu IL-6 Il1b , Jun , Socs3 , Srf , Vegfa 0,0042
tín hiệu qua trung gian cAMP Crem , Fpr2 , Gnal , Grm6 , Hrh3 0,024
Tín hiệu IGF-1 Igfbp4 , Jun , Socs3 , Srf 0,015
Thực bào qua trung gian thụ thể Fcγ ở đại thực bào và bạch cầu đơn nhân Appc3 , Hck , Hmox1 , Vav3 0,012
Con đường siêu tổng hợp cholesterol Fdps , Sqle 0,016
T helper biệt hóa tế bào CD40 , Ifbgr1 , Il21 0,042

IPA đã xác định mạng lưới gen bị ảnh hưởng bởi CBD trong các tế bào MOG T được kích thích bằng MOG35-55 (Hình. 3 và Các bác sĩ cho biết:và 4).4). Trong các mạng gen này, IPA biểu thị các bộ điều hòa ngược dòng chính có chức năng được điều chỉnh bởi CBD. Theo đó, Mạng 1 (Hình. 3) liên kết các tác động của CBD với điều chế IL-4, STAT5B, SATB1, CD28, NRF2 / NFE2L2 và NRF1 trong khi Mạng 2 (Hình. 4) liên kết các tác động của CBD với IL-2 và IL-1β cũng như với NFKB1 và EGR2.

Tệp bên ngoài chứa hình ảnh, hình minh họa, v.v. Tên đối tượng là 12974_2016_603_Fig4_HTML.jpg
Mở trong một cửa sổ riêng
Hình 4

Phân tích mạng gen IPA về điều chế CBD của các tế bào T MOG được kích thích — Mạng 2. Xem Hình. 2 và Các bác sĩ cho biết:and33 để biết chi tiết

Nhìn chung, chúng tôi cho thấy ở đây có nhiều cytokine, chemokine, thụ thể và các con đường truyền tín hiệu được điều chỉnh bởi CBD (Bảng 1, Hình. 1 và Các bác sĩ cho biết:và 2)2) so với quy định (Bảng 3) phù hợp với việc giảm sự tăng sinh tế bào T MOG và chức năng Th17 của chúng được chúng tôi cho thấy trước [ 12 , 24 ]. Tuy nhiên, trong số các gen điều hòa, chúng tôi tìm thấy chủ yếu các phân tử tế bào T điều hòa được biết là có tác dụng ức chế sự tăng sinh và hoạt động của tế bào T.

Xác thực bởi ELISA và qPCR

Một số sản phẩm gen được xác định bằng phân tích microarray là được điều chỉnh khác biệt đã được xác nhận bởi qPCR sử dụng β2-microglobulin làm gen tham chiếu) hoặc bằng ELISA (để định lượng sự tiết protein). Nhân vật 5acho thấy rằng sự kích thích T MOG với MOG35-55 dẫn đến tăng tiết protein IL-1β và việc ủ chung với CBD làm giảm nó trở lại mức kiểm soát. Hơn nữa, T MOG kích thích với MOG35-55 tăng bài tiết IL-3 bởi khoảng mười lần và mức này đã được dập tắt bởi CBD bằng 40% (Hình. 5b).

Một tệp bên ngoài chứa hình ảnh, hình minh họa, v.v. Tên đối tượng là 12974_2016_603_Fig5_HTML.jpg
Hình 5

ELISA của các cytokine IL-1β và IL-3 được giải phóng từ các tế bào T MOG được kích thích bằng MOG35-55 khi có hoặc không có CBD. APC / T MOG được kích thích với MOG35-55 ở 5 μg / ml trong 24 giờ khi có hoặc không có CBD ở 5 μM và lượng ( a ) IL-1β và ( b ) IL-3 trong môi trường nuôi cấy được xác định . 100% tương đương với hiệu ứng MOG35-55 tối đa, nghĩa là 15 ± 6 pg / ml đối với IL-1β và đến 377 ± 100 pg / ml đối với IL-3. Thống kê (một chiều ANOVA) và ký hiệu: a F (3,6) = 6,7, p  <0,05. b F (3,15) = 80,25, p  <0,001; Ký hiệu: p  <0,05, ### p <0,01 so với Kiểm soát, * p  <0,05, *** p  <0,001 so với các tế bào được kích thích MOG-35-55

Bàn 6cho thấy các ví dụ về phân tích qPCR của các sản phẩm gen đã chọn trong các tế bào T MOG được kích thích . Kích thích T MOG với MOG35-55 dẫn đến sự điều chỉnh cao mức mRNA của chemokine Xcl1 (62,7 lần) và mức này đã bị CBD ức chế khoảng bốn lần. Sự biểu hiện của Il12a cũng tăng lên bởi MOG35-55 (4,3 lần) và giảm xuống 2,6 lần khi CBD được thêm vào các tế bào T MOG được kích thích bằng MOG35-55 . Sự kích thích của các tế bào T MOG với MOG35-55 cũng tăng lên biểu hiện của Dusp6gấp 2,4 lần, tăng gấp 2,4 lần khi đồng ủ với CBD (khoảng 40%). Bảng cũng cho thấy một số gen khác mà quá trình phiên mã đã được tăng cường đáng kể chỉ nhờ CBD bao gồm Btla, Lag3 và Irf4 . Phiên mã của Btla, Lag3 và Irf4 được tăng thêm khi MOG35-55 và CBD được thêm vào cùng nhau. Điều thú vị là Il10 mRNA chỉ được tăng lên khi MOG35-55 và CBD được áp dụng cùng nhau nhưng không tuân theo MOG35-55 hoặc CBD được cho riêng lẻ. Những quan sát này phù hợp với biểu hiện mRNA được quan sát bằng phương pháp cấu hình gen.

Bảng 6

Xác thực qPCR của các phiên mã khác nhau trong mRNA được chuẩn bị từ các tế bào T MOG được kích thích bằng MOG35-55 và tác động của CBD

Biểu tượng Tên gen MOG một mình [gấp] $ CBD + MOG [gấp] $ Riêng CBD [gấp] $ ANOVA một chiều
Xcl1 Chemokine (C Motif) Ligand 1 62,7 ± 0,7 ## 17,9 ± 11,4 ** 1,6 ± 0,1 F (3,8) = 12,6, p  <0,01
IL12a Interleukin 12 4,3 ± 0,1 # 2,6 ± 0,3 * 0,8 ± 0,1 F (3,8) = 6,0, p  <0,05
Btla Bộ suy giảm tế bào lympho B và T 2,8 ± 0,4 ## 7,1 ± 0,4 *** 6,0 ± 0,5 ### F (3,8) = 60,9, p  <0,001
Dusp6 Phosphatase đặc hiệu kép 6 2,4 ± 0,4 3,3 ± 0,7 # 1,9 ± 0,3 F (3,8) = 3,3, p = 0,07
Irf4 Yếu tố điều hòa interferon 4 3,4 ± 0,6 ## 7,9 ± 0,5 *** 3,7 ± 0,3 ## F (3,8) = 43,3, p  <0,001
Lag3 & Gen kích hoạt tế bào bạch huyết 3 11,5 ± 0,3 ### 25,9 ± 2,3 *** 5,8 ± 1,5 * F (3,8) = 114, p  <0,001
IL10 & Interleukin 10 1,5 ± 0,3 3,4 ± 0,8 # 1,4 ± 0,3 F (3,11) = 3,6, p  = 0,05

$ Dữ liệu được biểu thị dưới dạng thay đổi lần so với điều khiển, không phải ô được kích thích (bằng 1). p  <0,05, ## p  <0,01, ### p  <0,01 so với tế bào T MOG đối chứng . * p  <0,05, ** p  <0,01, *** p  <0,001 so với các tế bào T MOG được kích thích bằng MOG-35-55 . & kết quả đã báo cáo trước đây [ 25 ]

Phân tích mạng lưới đồng biểu hiện gen có trọng số (WGCNA)

Chúng tôi đã áp dụng phân tích và phân nhóm WGCNA để bổ sung cho đặc điểm chức năng của những thay đổi trong biểu hiện gen do CBD gây ra trong T MOG được kích hoạt . Như đã đề cập trong Phương pháp, WGCNA phân cụm các bảng điểm liên quan đến chức năng thành các mô-đun theo cách không giám sát dựa trên mẫu biểu thức trên các mẫu. Kết quả của sự phân nhóm này có thể được xem như một biểu đồ dendrogram (Hình. 6a) trong đó mỗi nhánh tương ứng với một nhóm gen đồng biểu hiện (một mô-đun) được chỉ định một màu và sẽ được gọi bằng màu của nó trong phần còn lại của bản thảo.

Tệp bên ngoài chứa hình ảnh, hình minh họa, v.v. Tên đối tượng là 12974_2016_603_Fig6_HTML.jpg
Mở trong một cửa sổ riêng
Hình 6

Các mô-đun gen được phân nhóm WGCNA và mối tương quan của chúng với hiệu ứng CBD trong các tế bào T MOG được kích thích bằng MOG35-55 . Phân tích WGCNA xác định các mô-đun riêng biệt của các gen cùng biểu hiện. một biểu đồ Dendrogram cho thấy sự chồng chéo cấu trúc liên kết của các gen và mối quan hệ của chúng với các mô-đun được mã hóa màu bên dưới. b phân cụm các mô-đun kết quả. Khung màu cho biết các mô-đun chính có tương quan tích cực ( khung đỏ ) và tiêu cực ( khung xanh lục ) tương quan với hiệu ứng CBD trong T MOG được kích thích bằng MOG35-55 . c đồ thị mối quan hệ mô-đun-đặc điểm cho thấy mối tương quan của Spearman giữa các thành phần chính của mô-đun (hay còn gọi là mô-đun eigengenes [ME]; tronghàng mã màu ) và các phương pháp xử lý. Các giá trị hàng đầu trong mỗi hình vuông tượng trưng cho hệ số tương quan giữa ME và điều trị. Các giá trị dưới trong ngoặc là có liên quan p giá trị. Các mô-đun có tương quan cao với điều trị CBD + MOG35-55 được nhấn mạnh bằng cách sử dụng khung đen

Phân tích WGCNA đã nhóm các bảng điểm bị ảnh hưởng thành 36 mô-đun rời rạc (Hình. 6b). Tương quan Pearson của các mô-đun này cho thấy các mô-đun có tương quan đáng kể nhất với mỗi phương pháp điều trị (Hình. 6c). Các darkgrey mô-đun đã được chứng minh là có những tiêu cực đến hầu hết các tương quan ( r  = -0,5, p  = 0,05) và yellowgreen như tương quan tích cực nhất ( r  = 0,71, p  = 0,002) để kết hợp điều trị CBD + MOG35-55. Điều này trái ngược với hiệu ứng MOG35-55 trong đó mô-đun đồng biểu hiện gen darkgrey được công nhận là có tương quan thuận ( r  = 0,088, p  = 0,7) và mô-đun vàng xanh có tương quan nghịch ( r  = 0,35, p  = 0,2). Điều này chỉ ra rằng CBD đảo ngược các mô hình tương tác gen gây ra bởi sự kích thích MOG35-55 của TMOG . Để tìm kiếm cách giải thích chức năng của các liên kết này, chúng tôi đã chú thích các mô-đun tương quan CBD + MOG35-55 với các danh mục GO để làm nổi bật các chức năng sinh học chính được liên kết với hiệu ứng CBD trong các tế bào T MOG được kích thích . Các loại GO được xác định trong mô-đun darkgrey (chứa 94 gen Tệp bổ sung 1 : Bảng S2) dường như có liên quan chủ yếu với “ quá trình xử lý kháng nguyên và trình bày kháng nguyên peptit ngoại sinh thông qua MHC lớp II ” (GO: 0019882, GO: 0002504 GO: 0019886 ĐI: 0002495 ĐI: 0002478 ĐI: 0019884). Điều này có thể là do sự đại diện cao trong mô-đun này của các gen quy định quá trình xử lý kháng nguyên, ví dụ, H2-Ab1, CD9, Tmem66, CD74, Tlr2 và Fcrla. Các danh mục GO khác được xác định trong mô-đun darkgrey này bao gồm “ quá trình hệ thống miễn dịch ” (GO: 0002376), “ phản ứng phòng vệ ” (GO: 0006952), “ phản ứng viêm ” (GO: 0006954), “ quá trình trao đổi chất nitơ phản ứng ” (GO : 2001057), “ quy định sản xuất chemokine ” (GO: 0032642, tất cả trong thuật ngữ Quy trình sinh học), và “ ràng buộc ” (GO: 0005488; trong thuật ngữ Chức năng phân tử).

Các yellowgreen mô-đun (chứa 48 gen tập tin bổ sung 1 : Bảng S2) bao gồm gen như Ptpnm2, Slc30a1 và Btla. Phân tích GO đã điều chỉnh các thuật ngữ được chỉ định màu vàng xanh thành “ điều chỉnh các quá trình của hệ thống miễn dịch ” (GO: 0002682), “ phản ứng với kích thích ” (GO: 0048583), “ tín hiệu ” (GO: 0023051), “ giao tiếp tế bào ” (GO: 0010646) , “Sự kết dính tế bào ” (GO: 0030155), “ truyền tín hiệu ” (GO: 0009966; trong thuật ngữ Quy trình sinh học), “ hoạt động của yếu tố trao đổi guanyl-nucleotide ” (GO: 0005085; trong thuật ngữ Chức năng phân tử) và “ bên ngoài của màng sinh chất”(GO: 0009897; Điều khoản thành phần di động). Tóm lại, phân tích WGCNA đã chứng minh rằng tác dụng chính của CBD là hạn chế sự hoạt hóa MOG35-55 của T MOG chủ yếu bằng cách nhắm mục tiêu các quá trình điều chỉnh quá trình xử lý và trình bày kháng nguyên.

Đi đến:

Thảo luận

Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã mô tả các tác động của CBD lên hoạt động phiên mã của tế bào T MOG kích hoạt tế bào sinh não MOG35-55 của chuột , tế bào sau này được biết là gây ra các bệnh lý tự miễn dịch. Trước đây chúng tôi đã chỉ ra rằng CBD làm giảm sản xuất mRNA IL-17 và IL-6 và tiết protein trong MOG35-55 được kích thích bởi MOG được đồng nuôi cấy với APC đồng thời tăng tổng hợp mRNA IL-10 chống viêm [ 24 , 26 ]. Song song đó, chúng tôi chỉ ra rằng CBD điều chỉnh tiêu cực quá trình phosphoryl hóa STAT3 trong khi tăng cường hoạt động STAT5, các chất điều hòa tích cực và tiêu cực chính của sự biệt hóa Th17, tương ứng [ 36 ], khẳng định thêm tác động điều hòa của CBD đối với chức năng Th17 của tế bào T bộ nhớ [ 26]. Hồ sơ gen hiện tại cho thấy CBD nhắm mục tiêu vào một số lượng tương đối nhỏ gen (163) trong một nhóm lớn những gen bị ảnh hưởng đáng kể bởi kích thích MOG35-55 (đạt tới 1936 phiên mã). Phân tích tin sinh học được thực hiện trên các bản sao bị ảnh hưởng CBD này đã tập hợp chúng thành các con đường khác nhau và mạng lưới gen làm trung gian cho tác động của CBD lên các tế bào T bộ nhớ được kích hoạt MOG35-55. Phù hợp với các nghiên cứu trước đây của chúng tôi, hồ sơ gen này xác nhận rằng CBD ảnh hưởng đến các quá trình khác nhau kiểm soát “ sự biệt hóa Th17 ”, bao gồm “ tín hiệu IL-6 ” (một con đường thúc đẩy trí nhớ thế hệ Th17) và chống viêm “ tín hiệu IL10 ” (được biết là hạn chế Th17 chức năng và tự miễn dịch qua trung gian Th17 [ 25 , 37 ]).

CBD điều hòa phiên mã 81 gen và điều hòa giảm 82 gen trong T MOG được kích thích bởi MOG35-55 . Ví dụ, CBD được phát hiện làm giảm mức mRNA được điều chỉnh MOG35-55 của các chất trung gian tiền viêm khác nhau bao gồm interleukin ( Il3 , Il1b và Il12a ), chemokine ( Xcl1 và Cxcl9 ) và các thụ thể ( Cxcr1 , Ifngr1 , Gpr83 ), các phân tử được biết đến tham gia vào quá trình tạo và chức năng Th17 [ 38 – 40 ]. Ngoài ra, CBD đã điều chỉnh các yếu tố của các tầng tín hiệu khác nhau, bao gồm các thành viên của siêu họ TNF (ví dụ: Tnfsf11 ,Tnfrsf18 ), các phân tử làm trung gian kết dính tế bào (ví dụ: Amica1 ) tăng trưởng, cấu trúc và chuyển hóa (ví dụ: Cdk5r1 , Tubb2d , Dgat1 ). Ảnh hưởng của CBD đối với các thành viên siêu họ TNF được thấy là rất đa dạng. Điều này không có gì đáng ngạc nhiên vì siêu họ TNF bao gồm một số lượng lớn các phân tử tham gia vào nhiều quá trình tế bào bao gồm viêm, tăng trưởng tế bào, chu kỳ tế bào, biệt hóa, chuyển hóa và sản xuất cytokine [ 41 ]. MRNA của yếu tố phiên mã bộ điều biến phần tử đáp ứng cAMP (CREM) cũng bị CBD ức chế đáng kể trong T MOG sinh não được kích hoạttế bào. Hoạt động CREM đã được chứng minh là kiểm soát sự biểu hiện IL-2 và IL-17 trong quá trình cam kết và phân phối dòng dõi CD4 [ 42 ]. Thật vậy, các tế bào T tự miễn dịch của con người được chứng minh là có biểu hiện tăng CREM làm tăng giải phóng IL-17 và khả năng tự miễn dịch của chúng ( ví dụ , trong bệnh lupus ban đỏ hệ thống và các bệnh lý giống MS [ 43 , 44 ]). Do đó, sự giảm Crem mRNA được tìm thấy ở đây có thể đóng vai trò quan trọng trong việc ức chế hoạt động giống Th17 của tế bào T MOG do CBD gây ra . Ức chế tuyến yên này CREM mRNA của CBD dường như không được trung gian quacác thụ thể cannabinoid CB1 và CB2, cả hai đều được biết là có ảnh hưởng đến hoạt động của adenylyl cyclase và sự hình thành cAMP [ 45 , 46 ]. Điều này là do CBD được chứng minh là có ái lực không đáng kể đối với các thụ thể này [ 47 ]. Hơn nữa, trước đây chúng tôi đã chỉ ra rằng tác động của CBD lên T MOG không liên quan đến các thụ thể này [ 12 , 24 ].

Một số bản sao do MOG35-55 gây ra được bảo tồn ở mức cao hoặc thậm chí được điều chỉnh thêm khi có CBD. Yếu tố phiên mã Egr2 là một trong những đại diện được điều chỉnh cao nhất của nhóm này cùng với một số cytokine ( Csf2 , Ifng , Tnf ), chemokine ( Ccl3 , Ccl4 , Cxcl10 ) và glycoprotein điều hòa ( Sema7a ). Mô hình biểu hiện gen này có thể cho thấy sự thúc đẩy bởi CBD của các điều kiện dung nạp dẫn đến sự cạn kiệt của tế bào T (năng lượng) và do đó dẫn đến vô hiệu hóa chức năng của tế bào T [ 48]. Thật vậy, EGR2 là một dấu hiệu năng lượng tế bào T đã được thừa nhận, cảm ứng sẽ kích hoạt chương trình di truyền thúc đẩy quá trình bắt giữ chu kỳ tế bào, cuối cùng làm giảm các phản ứng miễn dịch [ 49 , 50 ] bao gồm sản xuất IL-17 [ 51 , 52 ]. Thật vậy, gần đây chúng tôi đã chỉ ra rằng CBD tạo ra năng lượng phụ thuộc Egr2 trong các tế bào T gây não và CBD tăng cường biểu hiện của một số gen đặc trưng năng lượng khác bao gồm Il10 và Lag3 [ 26 ].

Việc sản xuất và bài tiết mRNA Ifng được điều chỉnh MOG35-55 không bị ảnh hưởng bởi CBD trong các tế bào MOG T được kích thích [ 24 ]. Kết quả này được tái tạo bằng phân tích microarray hiện tại cho thấy không có ảnh hưởng của CBD lên yếu tố phiên mã ngược dòng IFNγ Tbx21 mRNA. Mặt khác, các kết quả hiện tại cho thấy CBD có tác dụng tăng cường mạnh mẽ đối với một số bảng điểm phụ thuộc IFN bao gồm Irf4 , Ifit3 , Rsad2 / Viperin và Mx2 . Interferon loại I (IFN-α và -β) và loại II (IFN-γ) được biết là trung gian cho các đáp ứng miễn dịch bẩm sinh và ức chế sự gia tăng của các tế bào nhiễm vi rút [ 53]. IFNs có tác dụng chống tăng sinh và điều hòa miễn dịch và các tế bào biểu hiện IFNγ được chứng minh là chống lại hoạt động của Th17 [ 54 ]. Sự thay đổi trong mô hình gen IFN-kích thích (kể cả trong iFit , MX2 , Cxcl10 ) và / hoặc trong Jak hoạt động / STAT, một con đường IFN-phụ thuộc chủ yếu, nguyên nhân thất bại trong sự khoan dung miễn dịch dẫn đến T bệnh lý tự miễn dịch trung gian tế bào ( ví dụ , gõ Tôi tiểu đường) [ 55 ]. Do đó, chúng tôi giả định rằng các con đường kiểm soát IFN tăng cường CBD có thể góp phần vào tác dụng chống tăng sinh CBD trong các tế bào T bộ nhớ được kích hoạt, như chúng tôi đã quan sát trước đây [ 12 ].

Yếu tố điều hòa interferon 4 (IRF4, một yếu tố hạt nhân đặc hiệu của tế bào lympho) được chứng minh là yếu tố thúc đẩy cốt lõi của các gen phụ thuộc IFN khác như Rsad2 và Ifit3 [ 56 ]. IRF4 được báo cáo là làm trung gian cho sự biệt hóa của các tế bào T CD4 + ngây thơ thành các dòng T trợ giúp khác nhau [ 57 ] IRF4 hiệp đồng mạnh mẽ với tín hiệu NFAT để tăng cường hoạt động thúc đẩy của cytokine IL-4 chống viêm [ 58 ]. Thật vậy, trong tay chúng tôi Nfatc1 mRNA, một phần tử của trục truyền tín hiệu NFAT, đã được điều chỉnh bởi CBD.

Sự phiên mã của một số gen đã bị điều hòa bởi kích thích MOG35-55. Nhóm gen này bao gồm các thụ thể IL-17 ( Il17re biến thể 1 và 2, Il17rc ). Điều thú vị là CBD đã không đảo ngược điều hòa giảm mRNA Il17r này cho thấy CBD không can thiệp vào cơ chế phản hồi tiêu cực nội tại hạn chế hoạt động của các tế bào T bộ nhớ.

Sự hoạt hóa tế bào T do kháng nguyên xảy ra sau sự trình bày peptit bởi các phân tử phức hợp tương thích mô chính lớp II (MHCII) trên tế bào APC. Một số phân tử điều hòa tiêu cực các tương tác APC / T này [ 59 ]. Nghiên cứu của chúng tôi cho thấy CBD là chất cảm ứng mạnh mẽ các chất điều hòa âm tính của tương tác APC / T vì CBD làm tăng mức mRNA của: Chất suy giảm tế bào lympho B và T ( Btla / Cd272 ); gen kích hoạt tế bào lympho 3 ( Lag3 / Cd223 ); cụm biệt hóa 69 ( Cd69 ) và bộ tiếp hợp xuyên màng liên kết với thụ thể tế bào T 1 / Phân tử tương tác với thụ thể tế bào T ( Trat1/ TRIM). Các phân tử này là thành viên của một nhóm rộng, có liên quan về cấu trúc của các thụ thể immunoglobulin được tìm thấy để đóng vai trò là dấu hiệu của các kiểu hình điều hòa tế bào T cảm ứng khác nhau liên quan đến việc ức chế Th17 và cải thiện các bệnh lý giống MS [ 59 – 62 ]. Ví dụ, LAG3 là một chất tương đồng của thụ thể CD4, bằng cách can thiệp vào MHCII trên APC khi tiếp xúc với kháng nguyên sẽ ức chế chức năng và sự mở rộng của các tế bào T bộ nhớ [ 63 ] làm giảm IL-17 và tăng tiết IL-10, theo cách này ngăn ngừa tự miễn dịch ở chuột [ 64 , 65 ]. Chuột thiếu thụ thể xuyên màng CD69 sẽ phát triển các dạng bệnh lý tự miễn dịch trầm trọng hơn bao gồm viêm khớp, viêm da tiếp xúc, hen suyễn dị ứng và viêm cơ tim tự miễn [66 ]. Thật vậy, các tế bào T thiếu hụt CD69 chứng tỏ sự biệt hóa tăng lên thành các tế bào Th17, giải phóng IL-17 cao hơn cũng như các hoạt động gia tăng trên con đường Jak3 / Stat5 và RORγt [ 67 ] (Martin 2010). Tương tự, thắt BTLA với phối tử của nó, chất trung gian xâm nhập virus herpes (HVEM / TNFRSF14), đã được chứng minh là làm giảm sự tăng sinh tế bào T [ 68 , 69 ] và thúc đẩy năng lượng [ 70 ]. Con đường BTLA / HVEM chức năng duy trì khả năng dung nạp miễn dịch và ngăn ngừa tự miễn dịch (để xem xét lại, xem [ 71 ] và thiếu hụt BTLA ở chuột dẫn đến viêm khớp dạng thấp qua trung gian tế bào T, thâm nhiễm tế bào lympho, các bệnh giống viêm gan tự miễn, và EAE [ 72 – 74]. CTLA-4 (CD152) là một thụ thể ức chế mà ở trạng thái không hoạt động, nó nằm trong nội bào và theo nhu cầu được vận chuyển bởi protein TRAT1 / TRIM (được điều chỉnh bởi CBD) đến màng [ 75 ]. CTLA-4 cạnh tranh tiêu cực trên tế bào T với CD28, một phân tử tế bào T đồng kích thích, liên kết với các chất đồng hoạt hóa CD80 và CD86 trên tế bào APC [ 76 , 77 ]. Sự gia tăng biểu hiện CTLA4 phụ thuộc TRAT1 / TRIM dẫn đến việc ức chế sự mở rộng tế bào T sinh não và sự phát triển EAE [ 78 ]. Đồng ý với điều này, biểu hiện CTLA-4 suy yếu trên tế bào T được tìm thấy có liên quan đến việc tăng giải phóng IL-17 và EAE nghiêm trọng hơn [ 79]. Hơn nữa, những con chuột thiếu CTLA-4 biểu hiện kiểu hình tự miễn dịch với sự phá hủy cơ quan qua trung gian tế bào T [ 80 – 82 ] Do đó, sự điều hòa CBD của những chất ức chế mạnh mẽ này của giao tiếp APC / T sẽ phát huy tác dụng điều hòa miễn dịch mạnh mẽ trong MOG35-55 T MOG hoạt hóa dẫn đến hoạt động bị ức chế của chúng. Thật vậy, phân tích WGCNA bổ sung đã xác nhận vai trò ức chế của CBD trong các quá trình liên quan đến việc trình bày và xử lý kháng nguyên và tương tác APC / T MOG . Hơn nữa, những quan sát này phù hợp với báo cáo trước đây của chúng tôi cho thấy CBD làm giảm sự hoạt hóa của các tế bào B (APC chính ở ngoại vi) được ủ với T MOG cũng như biểu hiện MHCII trên các tế bào này [ 26].

Các loại oxy phản ứng được tạo ra chủ yếu bởi các đại thực bào và tế bào thần kinh bị tổn thương, làm tăng phản ứng miễn dịch và kích hoạt tế bào T, lan truyền quá trình khử men và thoái hóa thần kinh [ 83 ]. Hồ sơ gen hiện tại liên kết các hiệu ứng CBD với yếu tố nhân-erythroid 2 liên quan đến yếu tố 2 (Nfe2l2 / Nrf2)-chương trình di truyền chống oxy hóa đã được kiểm chứng, được biết là có tác dụng điều hòa miễn dịch [ 84 , 85 ]. Kết quả của chúng tôi cho thấy CBD tăng cường sự biểu hiện của các gen mục tiêu Nrf2 bao gồm Heme oxygenase-1 (Hmox-1 mã hóa protein HO-1) và metallothioneins ( Mt1 và Mt2). Thật vậy, chuột Mt (- / -) cho thấy sự thâm nhập của đại thực bào và tế bào lympho T vào thần kinh trung ương cũng như tăng giải phóng cytokine, stress oxy hóa và tổn thương sợi trục so với các đồng loại EAE kiểu hoang dã của chúng [ 86 ]. HO-1 được chứng minh là làm giảm các phản ứng viêm, ví dụ , thông qua cảm ứng cytokine IL10 chống viêm và điều chỉnh con đường Jak / STAT [ 87 ]. Thật vậy, cảm ứng dược lý hoặc di truyền của các gen chống oxy hóa phụ thuộc Nrf2 (tức là, Hmox1 , Mt1 và Mt2 ) ở chuột EAE đã dẫn đến giảm mức IL-17 và giảm mức độ nghiêm trọng của EAE [ 88]. Hơn nữa, chuột Hmox1 – / – C57BL / 6 phát triển chứng tê liệt giống EAE và khử men thần kinh trung ương tăng cường trong khi sự phục hồi HO-1 làm giảm sự tiến triển của EAE và tái phát [ 89 ]. Điều thú vị là tác dụng bảo vệ này của HO-1 có liên quan đến việc ức chế sự biểu hiện MHCII của APC thông qua cơ chế liên quan đến carbon monoxide, một sản phẩm chống oxy hóa của hoạt động HO-1. Do đó, sự cảm ứng CBD của các gen chống oxy hóa phụ thuộc Nfe2l2 / Nrf2 có thể là một trong những cơ chế chính thúc đẩy tác dụng chống viêm của cannabinoid này trong tế bào T MOG và EAE. Sự điều hòa CBD tương tự của các gen chống oxy hóa đã được chúng tôi báo cáo trong các tế bào vi mô được kích thích bằng LPS và tĩnh lặng [ 30 , 90]. Những phát hiện này cho thấy điều hòa miễn dịch phụ thuộc Nrf2 có thể là một tính năng quan trọng của cannabinoid này góp phần vào tác dụng chống viêm của nó. Tuy nhiên, chúng ta không thể loại trừ rằng CBD cũng ảnh hưởng đến một số con đường khác, ví dụ, các thụ thể đối với A2A cũng như các dimer của CB2 / 5HT1A [ 91 ]. Ngoài ra, CBD đã được chứng minh là làm tăng mức nội tiết tố, được biết đến để điều chỉnh các chức năng miễn dịch [ 92 ], do đó nó có thể gián tiếp thực hiện các hoạt động điều hòa miễn dịch trên tế bào T thông qua các thụ thể CB2, trước đây đã được đề xuất để điều chỉnh quá trình tự miễn dịch qua trung gian tế bào T. [ 93 ].

Đi đến:

Kết luận

Tóm lại, việc lập hồ sơ biểu hiện gen sau đó là các phân tích tin sinh học chứng minh rằng CBD thực hiện tác dụng điều hòa miễn dịch của nó trong các tế bào T MOG bộ nhớ được kích hoạt thông qua một số cơ chế: (a) bằng cách ngăn chặn phiên mã tiền viêm và ức chế các con đường có lợi cho chức năng và biệt hóa Th17, (b) bằng cách thúc đẩy a thiết lập phiên mã dẫn đến cạn kiệt / dung nạp tế bào T, (c) bằng cách tăng cường chương trình chống tăng sinh phụ thuộc IFN, (d) bằng cách tăng cường cơ chế đồng ức chế tế bào T nội tại cản trở giao tiếp APC / T và trình bày kháng nguyên hiệu quả, và (e) bằng cách tạo ra chất chống oxy hóa giải quyết tình trạng viêm.

Đi đến:

Các từ viết tắt

Tế bào trình diện kháng nguyên APC , CBD cannabidiol, viêm não tủy tự miễn thực nghiệm EAE , bản thể học gen GO , IFN interferon, IL interleukin, phân tích con đường khéo léo IPA , MOG35-55 myelin oligodendrocyte glycoprotein 35-55, MOG MOG35-55 tế bào T đặc hiệu, WGCNA phân tích mạng đồng biểu hiện gen có trọng số

Đi đến:

Sự nhìn nhận

Dòng tế bào T MOG được cung cấp bởi phòng thí nghiệm của Giáo sư Avraham Ben-Nun từ Khoa Miễn dịch học tại Viện Khoa học Weizmann, Rehovot, Israel.

Kinh phí

Công trình này được hỗ trợ bởi Quỹ Nghiên cứu Y khoa Tiến sĩ Miriam và Sheldon G. Adelson. AJ được hỗ trợ bởi Bộ Khoa học hấp thụ Israel. Chúng tôi ghi nhận sự hỗ trợ của Trung tâm Tin học NINDS về Di truyền thần kinh và Tế bào thần kinh (P30 NS062691).

Sự sẵn có của dữ liệu và vật liệu

Không có dữ liệu, phần mềm, cơ sở dữ liệu, ứng dụng / công cụ nào có sẵn ngoài các báo cáo trong nghiên cứu này. Dữ liệu hỗ trợ các kết luận được trình bày trong bản thảo.

Tác giả đóng góp

EK đã thiết kế và thực hiện các thí nghiệm, thực hiện phân tích IPA và viết bài báo. FG và GC đã thực hiện các thí nghiệm microarray và phân tích dữ liệu. AJ thực hiện tách chiết mRNA và phân tích qPCR về biểu hiện gen. NK và EK đã cung cấp bí quyết thiết lập và nuôi cấy các dòng tế bào T MOG . EK, AJ, FG, GC, NK và ZV đã đóng góp vào các cuộc thảo luận về nội dung bài báo, đồng thời xem xét và chỉnh sửa bản thảo trước khi gửi.

Lợi ích cạnh tranh

Các tác giả tuyên bố rằng họ không có lợi ích cạnh tranh.

Đồng ý xuất bản

Không áp dụng.

Phê duyệt đạo đức và đồng ý tham gia

Tất cả những con chuột được sử dụng trong các nghiên cứu này đều được duy trì theo hướng dẫn của Ủy ban Sử dụng và Chăm sóc Động vật của Tổ chức (IACUC). Các thí nghiệm trên động vật đã được Viện Khoa học Weizmann và IACUC của Đại học Tel Aviv chấp thuận và thực hiện.

Các tệp bổ sung

Tệp bổ sung 1: Bảng S1. (234K, doc)

Danh sách các đoạn mồi được sử dụng để xác nhận qPCR mức mRNA của các gen đã chọn trong tế bào T MOG đã được tinh sạch . Bảng S2. WGCNA giao nội dung gen của yellowgreen và darkgrey mô-đun, phân loại như là tương quan nhất với điều trị CBD trong MOG35-55 kích thích T MOG . (DOC 233 kb)

Đi đến:

Người giới thiệu

1. Klein TW. Thuốc dựa trên cannabinoid như một liệu pháp điều trị chống viêm. Nat Rev Immunol. Năm 2005; 5 : 400–11. doi: 10.1038 / nri1602. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
2. Nagarkatti P, Pandey R, Rieder SA, Hegde VL, Nagarkatti M. Cannabinoids làm thuốc chống viêm mới. Med Chem trong tương lai. Năm 2009; 1 : 1333–1349. doi: 10.4155 / fmc.09.93. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
3. Eisenstein TK, Meissler JJ. Ảnh hưởng của Cannabinoids đối với chức năng tế bào T và khả năng chống nhiễm trùng. J Thuốc miễn dịch thần kinh. Năm 2015; 10 : 204–16. doi: 10.1007 / s11481-015-9603-3. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
4. Fernández-Ruiz J, Sagredo O, Pazos MR, García C, Pertwee R, Mechoulam R, Martinez-Orgado J. Cannabidiol cho rối loạn thoái hóa thần kinh: những ứng dụng lâm sàng mới quan trọng cho phytocannabinoid này? Br J Clin Pharmacol. Năm 2013; 75 (2): 323–33. doi: 10.1111 / j.1365-2125.2012.04341.x. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
5. Thomas BF, Gilliam AF, Burch DF, Roche MJ, Seltzman HH. Các phân tích liên kết thụ thể so sánh của các chất chủ vận và chất đối kháng cannabinoid. J Pharmacol Exp Ther. Năm 1998; 285 : 285–92. [ PubMed ] [ Google Scholar ]
6. Zuardi AW. Cannabidiol: từ cannabinoid không hoạt động thành thuốc có phổ tác dụng rộng. Rev Bras Psiquiatr. Năm 2008; 30 : 271–80. doi: 10.1590 / S1516-44462008000300015. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
7. Malfait AM, Gallily R, Sumariwalla PF, Malik AS, Andreakos E, Mechoulam R, Feldmann M. Proc Natl Acad Sci US A. 2009; 97 : 9561–9566. doi: 10.1073 / pnas.160105897. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
8. Weiss L, Zeira M, Reich S, Har-Noy M, Mechoulam R, Slavin S, Gallily R. Cannabidiol làm giảm tỷ lệ mắc bệnh tiểu đường ở chuột tiểu đường không béo phì. Quyền tự trị. Năm 2006; 39 : 143–151. doi: 10.1080 / 08916930500356674. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
9. Hegde VL, Nagarkatti PS, Nagarkatti M. Vai trò của tế bào ức chế có nguồn gốc từ dòng tủy trong việc cải thiện tình trạng viêm gan tự miễn thực nghiệm sau khi kích hoạt các thụ thể TRPV1 bằng cannabidiol. PLoS Một. 2011; 6 : e18281. doi: 10.1371 / journal.pone.0018281. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
10. van Zwam M, Huizinga R, Melief MJ, Wierenga-Wolf AF, van Meurs M, Voerman JS, Biber KP, Boddeke HW, Höpken UE, Meisel C, Meisel A, Bechmann I, Hintzen RQ, ‘t Hart BA, Tình yêu S, Laman JD, Boven LA. Các kháng nguyên não trong các quần thể tế bào trình diện kháng nguyên khác biệt về mặt chức năng trong các hạch bạch huyết cổ tử cung trong MS và EAE. J Mol Med (Berl) năm 2009; 87 : 273–286. doi: 10.1007 / s00109-008-0421-4. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
11. Sospedra M, Martin R. Miễn dịch học của bệnh đa xơ cứng. Annu Rev Immunol. Năm 2005; 23 : 683–747. doi: 10.1146 / annurev.immunol.23.021704.115707. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
12. Kozela E, Lev N, Kaushansky N, Eilam R, Rimmerman N, Levy R, Vogel Z. Cannabidiol ức chế tế bào T gây bệnh, giảm hoạt hóa tế bào vi cột sống và cải thiện bệnh giống đa xơ cứng ở chuột C57BL / 6. Br J Pharmacol. 2011; 163 : 1507–19. doi: 10.1111 / j.1476-5381.2011.01379.x. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
13. Mecha M, Feliú A, Iñigo PM, Mestre L, Carrillo-Salinas FJ, Guaza C. Cannabidiol cung cấp sự bảo vệ lâu dài chống lại các tác động có hại của chứng viêm trong một mô hình vi rút của bệnh đa xơ cứng: một vai trò đối với các thụ thể A2A. Neurobiol Dis. Năm 2013; 59 : 141–150. doi: 10.1016 / j.nbd.2013.06.016. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
14. Duchi S, Ovadia H, Touitou E. Dùng thuốc qua đường mũi như một chiến lược không xâm lấn mới để điều trị hiệu quả bệnh đa xơ cứng. J Neuroimmunol. Năm 2013; 258 : 32–40. doi: 10.1016 / j.jneuroim.2013.02.013. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
15. Rahimi A, Faizi M, Talebi F, Noorbakhsh F, Kahrizi F, Naderi N. Tương tác giữa tác dụng bảo vệ của cannabidiol và palmitoylethanolamide trong mô hình thực nghiệm về bệnh đa xơ cứng ở chuột C57BL / 6. Khoa học thần kinh. Năm 2015; 290 : 279–87. doi: 10.1016 / j.neuroscience.2015.01.030. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
16. Podojil JR. Miller SD (2009) Cơ chế phân tử của thụ thể tế bào T và thắt / phong tỏa phân tử kích thích trong điều trị bệnh tự miễn. Immunol Rev. 2009; 229 : 337–55. doi: 10.1111 / j.1600-065X.2009.00773.x. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
17. Harrington LE, Hatton RD, Mangan PR, Turner H, Murphy TL, Weaver CT. Tế bào T có tác dụng CD4 + sản sinh ra interleukin 17 phát triển qua một dòng khác biệt với dòng T helper type 1 và 2. Nat Immunol. Năm 2005; 6 : 1123–32. doi: 10.1038 / ni1254. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
18. Kebir H, Kreymborg K, Ifergan I, Dodelet-Devillers A, Cayrol R, Bernard M, Giuliani F, Arbor N, Becher B, Prat A. Tế bào lympho TH17 của người thúc đẩy sự phá vỡ hàng rào máu não và viêm hệ thần kinh trung ương. Nat Med. Năm 2007; 13 : 1173–1175. doi: 10.1038 / nm1651. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
19. Laurence A, Tato CM, Davidson TS, Kanno Y, Chen Z, Yao Z, Blank RB, Meylan F, Siegel R, Hennighausen L, Shevach EM, O’Schea JJ. Tín hiệu Interleukin-2 thông qua STAT5 hạn chế sự tạo tế bào của T helper 17. Miễn dịch. Năm 2007; 26 : 371–81. doi: 10.1016 / j.immuni.2007.02.009. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
20. Yura M, Takahashi I, Serada M, Koshio T, Nakagami K, Yuki Y, Kiyono H. Vai trò của tế bào Th1 loại được MOG kích thích “thắp sáng” (GFP +) tế bào T CD4 + để phát triển bệnh viêm não tủy tự miễn thực nghiệm (EAE) J Autoimmun. Năm 2001; 17 : 17–25. doi: 10.1006 / jaut.2001.0520. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
21. Shevach EM. Mô hình động vật cho các bệnh tự miễn dịch và viêm nhiễm. Trong: Coligan JE, Kruisbeek AM, Margulies DH, Shevach EM, Strober W, biên tập viên. Các giao thức hiện tại trong miễn dịch học. New York: Wiley; 2011. trang 15.0.1–15.0.5. [ Google Scholar ]
22. Okuda Y, Okuda M, Apatoff BR, Posnett DN. Sự hoạt hóa của tế bào T CD4 (+) bộ nhớ và tế bào T CD8 (+) ở bệnh nhân đa xơ cứng. J Neurol Khoa học viễn tưởng. Năm 2005; 235 : 11–17. doi: 10.1016 / j.jns.2005.02.013. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
23. Aharoni R. Bảo vệ thần kinh điều hòa miễn dịch và tái tạo myelin – tác dụng điều trị cơ bản của glatiramer acetate: một đánh giá quan trọng. J Autoimmun. 2014; 54 : 81–92. doi: 10.1016 / j.jaut.2014.05.005. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
24. Kozela E, Juknat A, Kaushansky N, Rimmerman N, Ben-Nun A, Vogel Z. Cannabinoids làm giảm kiểu hình tự miễn viêm th17. J Thuốc miễn dịch thần kinh. Năm 2013; 8 : 1265–76. doi: 10.1007 / s11481-013-9493-1. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
25. Zhou L, Ivanov II, Spolski R, Min R, Shenderov K, Egawa T, Levy DE, Leonard WJ, Littman DR. IL-6 lập chương trình biệt hóa tế bào T (H) -17 bằng cách thúc đẩy sự tham gia tuần tự của con đường IL-21 và IL-23. Nat Immunol. Năm 2007; 8 : 967–974. doi: 10.1038 / ni1488. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
26. Kozela E, Juknat A, Kaushansky N, Ben-Nun A, Coppola G, Vogel Z. Cannabidiol, một cannabinoid không hoạt động thần kinh, dẫn đến năng lượng phụ thuộc EGR2 trong các tế bào T tạo não được kích hoạt. J Viêm thần kinh. Năm 2015; 12 : 52. doi: 10.1186 / s12974-015-0273-0. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
27. Harris TJ, Grosso JF, Yen HR, Xin H, Kortylewski M, Albesiano E, Hipkiss EL, Getnet D, Goldberg MV, Maris CH, Housseau F, Yu H, Pardoll DM, Drake CG. Tiên tiến: Yêu cầu in vivo đối với tín hiệu STAT3 trong quá trình phát triển TH17 và khả năng tự miễn dịch phụ thuộc vào TH17. J Immunol. Năm 2007; 179 : 4313–4317. doi: 10.4049 / jimmunol.179.7.4313. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
28. Kaushansky N, Zhong MC, Kerlero de Rosbo N, Hoeftberger R, Lassmann H, Ben-Nun A. Tính đặc hiệu biểu hiện của tế bào T và B tự hoạt động liên quan đến thực nghiệm viêm não tủy tự miễn và viêm dây thần kinh thị giác do protein đặc hiệu tế bào oligodendrocyte trong SJL / J chuột. J Immunol. Năm 2006; 177 : 7364–76. doi: 10.4049 / jimmunol.177.10.7364. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
29. Kozela E, Juknat A, Gao F, Coppola G, Kaushansky N, Vogel Z. Tìm hiểu sâu về biểu hiện gen của các tế bào T tự miễn dịch gây bệnh được kích hoạt — các nghiên cứu trong mô hình giống bệnh đa xơ cứng thực nghiệm. Hệ miễn dịch Res. 2016; 12: 108. doi: 10.4172 / 1745-7580.10000108.
30. Juknat A, Pietr M, Kozela E, Rimmerman N, Levy R, Gao F, Coppola G, Geschwind D, Vogel Z. Phân tích microarray và lộ trình cho thấy các cơ chế riêng biệt cơ bản điều chế qua trung gian cannabinoid của sự kích hoạt BV-2 do LPS gây ra tế bào vi mô. PLoS Một. Năm 2013; 8 : e61462. doi: 10.1371 / journal.pone.0061462. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
31. Gentleman RC, Carey VJ, Bates DM, Bolstad B, Dettling M, Dudoit S, Ellis B, Gautier L, Ge Y, Gentry J, Hornik K, Hothorn T, Huber W, Iacus S, Irizarry R, Leisch F, Li C, Maechler M, Rossini AJ, Sawitzki G, Smith C, Smyth G, Tierney L, Yang JY, Zhang J. Bioconductor: phát triển phần mềm mở cho sinh học tính toán và tin sinh học. Genome Biol. Năm 2004; 5 : R80. doi: 10.1186 / gb-2004-5-10-r80. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
32. Coppola G. Thiết kế, thực hiện và giải thích một nghiên cứu biểu hiện gen dựa trên microarray. Phương pháp Mol Biol. 2011; 793 : 417–39. doi: 10.1007 / 978-1-61779-328-8_28. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
33. Zhang B, Horvath S. Một khuôn khổ chung để phân tích mạng lưới đồng biểu hiện gen có trọng số. Stat Appl Genet Mol Biol. Năm 2005; 4 : Điều 17. [ PubMed ] [ Google Scholar ]
34. Park CC, Gale GD, de Jong S, Ghazalpour A, Bennett BJ, Farber CR, Langfelder P, Lin A, Khan AH, Eskin E, Horvath S, Lusis AJ, Ophoff RA, Smith DJ. Mạng lưới gen liên quan đến chứng sợ có điều kiện ở chuột được xác định bằng cách sử dụng phương pháp di truyền hệ thống. BMC Syst Biol. 2011; 5 : 43. doi: 10.1186 / 1752-0509-5-43. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
35. Fogel BL, Cho E, Wahnich A, Gao F, Becherel OJ, Wang X, Fike F, Chen L, Criscuolo C, De Michele G, Filla A, Collins A, Hahn AF, Gatti RA, Konopka G, Perlman S , Lavin MF, Geschwind DH, Coppola G. Sự đột biến của senataxin làm thay đổi mạng lưới phiên mã đặc hiệu của bệnh ở những bệnh nhân mất điều hòa với chứng ngưng vận động cơ loại 2. Hum Mol Genet. 2014; 23 (18): 4758–69. doi: 10.1093 / hmg / ddu190. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
36. Yang XP, Ghoreschi K, Steward-Tharp SM, Rodriguez-Canales J, Zhu J, Grainger JR, Hirahara K, Sun HW, Wei L, Vahedi G, Kanno Y, O’Schea JJ, Laurence A. Phản đối quy định của locus mã hóa IL-17 thông qua các hành động trực tiếp, tương hỗ của STAT3 và STAT5. Nat Immunol. 2011; 12 : 247–54. doi: 10.1038 / ni.1995. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
37. Fujio K, Okamura T, Yamamoto K. Gia đình tế bào T CD4 + tiết IL-10. Adv Immunol. Năm 2010; 105 : 99–130. doi: 10.1016 / S0065-2776 (10) 05004-2. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
38. Chavany C, Vicario-Abejón C, Miller G, Jendoubi M. Chuột chuyển gen cho interleukin 3 phát triển thoái hóa tế bào thần kinh vận động liên quan đến phản ứng tự miễn dịch chống lại tế bào thần kinh vận động tủy sống. Proc Natl Acad Sci US A. 1998; 95 (19): 11354–9. doi: 10.1073 / pnas.95.19.11354. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
39. Sutton CE, Lalor SJ, Sweeney CM, Brereton CF, Lavelle EC, Mills KH. Interleukin-1 và IL-23 tạo ra IL-17 bẩm sinh từ tế bào gammadelta T, khuếch đại các đáp ứng Th17 và tự miễn dịch. Miễn dịch. Năm 2009; 31 : 331–41. doi: 10.1016 / j.immuni.2009.08.001. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
40. Biểu hiện thụ thể Mony JT, Khorooshi R1, Owens T. Chemokine bởi tế bào T viêm trong EAE. Tế bào thần kinh phía trước. 2014; 8 : 187. doi: 10.3389 / fncel.2014.00187. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
41. Croft M, Duan W, Choi H, Eun SY, Madedlydi S, Mehta A. Siêu họ TNF trong bệnh viêm: dịch những hiểu biết cơ bản. Xu hướng Immunol. 2012; 33 : 144–52. doi: 10.1016 / j.it.2011.10.004. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
42. Hedrich CM, Crispin JC, Rauen T, Ioannidis C, Apostolidis SA, Lo MS, Kyttaris VC, Tsokos GC. cAMP bộ điều biến phần tử đáp ứng α kiểm soát biểu hiện IL2 và IL17A trong quá trình cam kết dòng dõi CD4 và phân phối tập hợp con trong bệnh lupus. Proc Natl Acad Sci US A. 2012; 109 : 16606–11. doi: 10.1073 / pnas.1210129109. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
43. Rauen T, Hedrich CM, Juang YT, Tenbrock K, Tsokos GC. Protein α của bộ điều biến yếu tố đáp ứng cAMP (CREM) gây ra sự biểu hiện interleukin 17A và làm trung gian cho những thay đổi biểu sinh tại vị trí gen interleukin-17A ở bệnh nhân lupus ban đỏ hệ thống. J Biol Chem. 2011; 286 : 43437–46. doi: 10.1074 / jbc.M111.299313. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
44. Koga T, Hedrich CM, Mizui M, Yoshida N, Otomo K, Lieberman LA, Rauen T, Crispín JC, Tsokos GC. Sự kích hoạt AKT / mTOR và CREM-α phụ thuộc CaMK4 làm cơ sở cho sự mất cân bằng Th17 liên quan đến tự miễn dịch. J Clin Đầu tư. 2014; 124 : 2234–45. doi: 10.1172 / JCI73411. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
45. Vogel Z, Barg J, Levy R, Saya D, Heldman E, Mechoulam R. Anandamide, một hợp chất nội sinh của não, tương tác đặc biệt với các thụ thể cannabinoid và ức chế adenylate cyclase. J Neurochem. Năm 1993; 61 : 352–355. doi: 10.1111 / j.1471-4159.1993.tb03576.x. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
46. Rhee MH, Bayewitch M, Avidor-Reiss T, Levy R, Vogel Z. Sự hoạt hóa thụ thể cannabinoid điều chỉnh khác nhau các isozyme adenylyl cyclase khác nhau. J Neurochem. Năm 1998; 71 : 1525–1534. doi: 10.1046 / j.1471-4159.1998.71041525.x. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
47. Showalter VM, Compton DR, Martin BR, Abood ME. Đánh giá sự gắn kết trong một dòng tế bào được chuyển nạp biểu hiện một thụ thể cannabinoid ngoại vi (CB2): xác định các phối tử chọn lọc kiểu phụ của thụ thể cannabinoid. J Pharmacol Exp Ther. Năm 1996; 278 : 989–999. [ PubMed ] [ Google Scholar ]
48. Anderson PO, Manzo BA, Sundstedt A, Minaee S, Symonds A, Khalid S, Rodriguez-Cabezas ME, Nicolson K, Li S, Wraith DC, Wang P. Kích thích kháng nguyên dai dẳng làm thay đổi chương trình phiên mã trong tế bào T, dẫn đến dung nạp kháng nguyên đặc hiệu. Eur J Immunol. Năm 2006; 36 : 1374–85. doi: 10.1002 / eji.200635883. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
49. Harris JE, Bishop KD, Phillips NE, Mordes JP, Greiner DL, Rossini AA, Nghị sĩ Séc. Đáp ứng tăng trưởng sớm gen-2, một yếu tố phiên mã ngón tay kẽm, cần thiết để cảm ứng đầy đủ năng lượng vô tính trong tế bào T CD4. J Immunol. Năm 2004; 173 : 7331–7338. doi: 10.4049 / jimmunol.173.12.7331. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
50. Safford M, Collins S, Lutz MA, Allen A, Huang CT, Kowalski J, Blackford A, Horton MR, Drake C, Schwartz RH, Powell JD. Egr-2 và Egr-3 là những chất điều hòa tiêu cực của sự hoạt hóa tế bào T. Nat Immunol. Năm 2005; 6 : 472–480. doi: 10.1038 / ni1193. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
51. Zhu B, Symonds AL, Martin JE, Kioussis D, Wraith DC, Li S, Wang P. Gen phản ứng tăng trưởng sớm 2 (Egr-2) kiểm soát khả năng tự chịu đựng của tế bào T và ngăn ngừa sự phát triển của bệnh tự miễn dịch lupuslike. J Exp Med. Năm 2008; 205 : 2295–307. doi: 10.1084 / jem.20080187. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
52. Miao T, Raymond M, Bhullar P, Ghaffari E, Symonds AL, Meier UC, Giovannoni G, Li S, Wang P. Gen-2 phản ứng tăng trưởng sớm kiểm soát sự biểu hiện IL-17 và sự biệt hóa Th17 bằng cách điều hòa âm tính Batf. J Immunol. Năm 2013; 190 : 58–65. doi: 10.4049 / jimmunol.1200868. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
53. Zahoor MA, Xue G, Sato H, Murakami T, Takeshima SN, Aida Y. HIV-1 Vpr gây ra các gen kích thích interferon trong các đại thực bào có nguồn gốc monocyte ở người. PLoS Một. 2014; 9 : e106418. doi: 10.1371 / journal.pone.0106418. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
54. Steinman L. Sơ lược về tiền sử T (H) 17, bản sửa đổi lớn đầu tiên trong giả thuyết T (H) 1 / T (H) 2 về tổn thương mô qua trung gian tế bào T. Nat Med. Năm 2007; 13 : 139–145. doi: 10.1038 / nm1551. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
55. Panarina M, Kisand K, Alnek K, Heilman K, Peet A, Uibo R. Kích hoạt gen cảm ứng interferon và interferon ở bệnh nhân tiểu đường loại 1. Scand J Immunol. 2014; 80 : 283–92. doi: 10.1111 / sji.12204. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
56. Forero A, Moore PS, Sarkar SN. Vai trò của IRF4 trong cảm ứng gen do IFN kích thích và duy trì thời gian chờ đợi herpesvirus liên quan đến sarcoma Kaposi trong các tế bào u lympho tràn dịch nguyên phát. J Immunol. Năm 2013; 191 : 1476–1485. doi: 10.4049 / jimmunol.1202514. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
57. Huber M, Lohoff M. IRF4 tại ngã tư của tác động quyết định số phận tế bào T. Eur J Immunol. 2014; 44 : 1886–1895. doi: 10.1002 / eji.201344279. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
58. Rengarajan J, Mowen KA, McBride KD, Smith ED, Singh H, Glimcher LH. Yếu tố điều hòa interferon 4 (IRF4) tương tác với NFATc2 để điều chỉnh sự biểu hiện gen interleukin 4. J Exp Med. Năm 2002; 195 : 1003–1012. doi: 10.1084 / jem.20011128. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
59. Chen L, Ruồi DB. Cơ chế phân tử của tế bào T đồng kích thích và đồng ức chế. Nat Rev Immunol. Năm 2013; 13 : 227–42. doi: 10.1038 / nri3405. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
60. Yuan B, Zhao L, Fu F, Liu Y, Lin C, Wu X, Shen H, Yang Z. Một hạt nano mới có chứa MOG peptide với BTLA gây ra khả năng chống chịu của tế bào T và ngăn ngừa bệnh đa xơ cứng. Mol Immunol. 2014; 57 : 93–99. doi: 10.1016 / j.molimm.2013.08.006. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
61. Baitsch L, Legat A, Barba L, Fuertes Marraco SA, Rivals JP, Baumgaertner P, Christiansen-Jucht C, Bouzourene H, Rimoldi D, Pircher H, Rufer N, Matter M, Michielin O, Speiser DE. Sự đồng biểu hiện kéo dài của các thụ thể ức chế bởi các tế bào T CD8 của người tùy thuộc vào sự biệt hóa, tính đặc hiệu của kháng nguyên và khu trú giải phẫu. PLoS Một. 2012; 7 : e30852. doi: 10.1371 / journal.pone.0030852. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
62. Okazaki T, Okazaki IM, Wang J, Sugiura D, Nakaki F, Yoshida T, Kato Y, Fagarasan S, Muramatsu M, Eto T, Hioki K, Honjo T. Đồng thụ thể ức chế PD-1 và LAG-3 hoạt động hiệp đồng để ngăn chặn sự tự miễn dịch ở chuột. J Exp Med. 2011; 208 : 395–407. doi: 10.1084 / jem.20100466. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
63. Công nhân CJ, Vignali DA. Phân tử liên quan đến CD4, LAG-3 (CD223), điều chỉnh sự mở rộng của các tế bào T được hoạt hóa. Eur J Immunol. Năm 2003; 33 : 970–979. doi: 10.1002 / eji.200323382. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
64. Bettini M, Szymczak-Workman AL, Forbes K, Castellaw AH, Selby M, Pan X, Drake CG, Korman AJ, Vignali DA. Tiên tiến: bệnh tiểu đường tự miễn tăng tốc khi không có LAG-3. J Immunol. 2011; 187 (7): 3493–98. doi: 10.4049 / jimmunol.1100714. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
65. Jha V, Workman CJ, McGaha TL, Li L, Vas J, Vignali DA, Monestier M. Gen kích hoạt tế bào bạch huyết-3 (LAG-3) quy định tiêu cực khả năng tự miễn dịch do môi trường gây ra. PLoS Một. 2014; 9 : e104484. doi: 10.1371 / journal.pone.0104484. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
66. Martín P, Sánchez-Madrid F. CD69: một cơ quan điều chỉnh bất ngờ các phản ứng viêm do tế bào TH17 điều khiển. Tín hiệu khoa học. 2011; 4 : pe14. [ PubMed ] [ Google Scholar ]
67. Martín P, Gómez M, Lamana A, Cruz-Adalia A, Ramírez-Huesca M, Ursa MA, Yanez-Mo M, Sanchez-Madrid F. Sự liên kết CD69 với protein Jak3 / Stat5 quy định sự phân hóa tế bào Th17. Mol Cell Biol. Năm 2010; 30 : 4877–4889. doi: 10.1128 / MCB.00456-10. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
68. Watanabe N, Gavrieli M, Sedy JR, Yang J, Fallarino F, Loftin SK, Hurchla MA, Zimmerman N, Sim J, Zang X, Murphy TL, Russell JH, Allison JP, Murphy KM. BTLA là một thụ thể ức chế tế bào lympho có điểm tương đồng với CTLA-4 và PD-1. Nat Immunol. Năm 2003; 4 : 670–9. doi: 10.1038 / ni944. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
69. Sedy JR, Gavrieli M, Potter KG, Hurchla MA, Lindsley RC, Hildner K, Scheu S, Pfeffer K, Ware CF, Murphy TL, Murphy KM. Bộ suy giảm tế bào lympho B và T điều chỉnh sự hoạt hóa tế bào T thông qua tương tác với chất trung gian xâm nhập herpesvirus. Nat Immunol. Năm 2005; 6 : 90–98. doi: 10.1038 / ni1144. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
70. Hurchla MA, Sedy JR, Gavrieli M, Drake CG, Murphy TL, Murphy KM. Bộ suy giảm tế bào lympho B và T thể hiện sự đa hình về cấu trúc và biểu hiện và được cảm ứng mạnh trong các tế bào T anergic CD4. J Immunol. Năm 2005; 174 : 3377–3385. doi: 10.4049 / jimmunol.174.6.3377. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
71. Wu YL, Liang J, Zhang W, Tanaka Y, Sugiyama H. Immunotherapies: sự phong tỏa của các tín hiệu ức chế. Int J Biol Khoa học viễn tưởng. 2012; 8 : 1420–1430. doi: 10.7150 / ijbs.5273. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
72. Lin SC, Kuo CC, Chan CH. Mối liên quan giữa đa hình gen BTLA với nguy cơ mắc bệnh viêm khớp dạng thấp. J Khoa học y sinh. Năm 2006; 13 : 853–860. doi: 10.1007 / s11373-006-9113-7. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
73. Oya Y, Watanabe N, Owada T, Oki M, Hirose K, Suto A, Kagami S, Nakajima H, Kishimoto T, Iwamoto I, Murphy TL, Murphy KM, Saito Y. Phát triển và sản xuất bệnh giống viêm gan tự miễn dịch tự kháng thể với kháng nguyên nhân ở chuột thiếu chất suy giảm tế bào lympho B và T. Viêm khớp Thấp khớp. Năm 2008; 58 : 2498–510. doi: 10.1002 / art.23674. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
74. Wang Y, Subudhi SK, Anders RA, Lo J, Sun Y, Blink S, Wang Y, Wang J, Liu X, Mink K, Degrandi D, Pfeffer K, Fu YX. Vai trò của chất trung gian xâm nhập herpesvirus như một chất điều hòa tiêu cực các phản ứng qua trung gian tế bào T. J Clin Đầu tư. Năm 2005; 115 : 711–717. doi: 10.1172 / JCI200522982. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
75. Valk E, Leung R, Kang H, Kaneko K, Rudd CE, Schneider H. Phân tử tương tác với thụ thể tế bào T hoạt động như một người giám sát để điều chỉnh biểu hiện bề mặt của thụ thể lõi CTLA-4. Miễn dịch. Năm 2006; 25 : 807–821. doi: 10.1016 / j.immuni.2006.08.024. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
76. Krummel MF, Allison JP. CD28 và CTLA-4 có tác động đối lập đến phản ứng của tế bào T với kích thích. J Exp Med. Năm 1995; 182 : 459–465. doi: 10.1084 / jem.182.2.459. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
77. Walunas TL, Lenschow DJ, Bakker CY, Linsley PS, Freeman GJ, Green JM, Thompson CB, Bluestone JA. CTLA-4 có thể hoạt động như một chất điều hòa tiêu cực trong việc kích hoạt tế bào T. Miễn dịch. Năm 1994; 1 : 405–413. doi: 10.1016 / 1074-7613 (94) 90071-X. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
78. Hurwitz AA, Sullivan TJ, Sobel RA, Allison JP. Kháng nguyên tế bào lympho T gây độc tế bào-4 (CTLA-4) hạn chế sự mở rộng của tế bào T sinh não trên chuột thí nghiệm viêm cơ não tự miễn (EAE) kháng BALB / c. Proc Natl Acad Sci US A. 2002; 99 : 3013–3017. doi: 10.1073 / pnas.042684699. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
79. Vogel I, Kasran A, Cremer J, Kim YJ, Boon L, Van Gool SW, Ceuppens JL. Sự phong tỏa con đường kích thích CD28 / CTLA-4 / B7 ảnh hưởng đến chức năng điều hòa của tế bào T trong quá trình tự miễn dịch. Eur J Immunol. Năm 2015; 45 : 1832–1841. doi: 10.1002 / eji.201445190. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
80. Tivol EA, Borriello F, Schweitzer AN, Lynch WP, Bluestone JA, Sharpe AH. Mất CTLA-4 dẫn đến tăng sinh bạch huyết lớn và phá hủy mô đa cơ quan gây tử vong, cho thấy vai trò điều tiết tiêu cực quan trọng của CTLA-4. Miễn dịch. Năm 1995; 3 : 541–547. doi: 10.1016 / 1074-7613 (95) 90125-6. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
81. Waterhouse P, Penninger JM, Timms E, Wakeham A, Shahinian A, Lee KP, Thompson CB, Griesser H, Mak TW. Rối loạn tăng sinh bạch huyết với khả năng gây chết sớm ở chuột thiếu Ctla-4. Khoa học. Năm 1995; 270 : 985–988. doi: 10.1126 / khoa.270.5238.985. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
82. Romo-Tena J, Gómez-Martín D, Alcocer-Varela J. CTLA-4 và khả năng tự miễn dịch: những hiểu biết mới về cơ chế điều chỉnh kép của khả năng chịu đựng. Autoimmun Rev. 2013; 12 : 1171–1176. doi: 10.1016 / j.autrev.2013.07.002. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
83. Gilgun-Sherki Y, Melamed E, Offen D. Vai trò của stress oxy hóa trong cơ chế bệnh sinh của bệnh đa xơ cứng: cần có liệu pháp chống oxy hóa hiệu quả. J Neurol. Năm 2004; 251 : 261–8. doi: 10.1007 / s00415-004-0348-9. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
84. Chen XL, Kunsch C. Cảm ứng gen bảo vệ tế bào thông qua Nrf2 / con đường yếu tố phản ứng chống oxy hóa: một phương pháp điều trị mới để điều trị các bệnh viêm nhiễm. Curr Pharm Des. Năm 2004; 10 (8): 879–91. doi: 10.2174 / 1381612043452901. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
85. Sandberg M, Patil J, D’Angelo B, Weber SG, Mallard C. Điều hòa NRF2 trong sức khỏe não và bệnh tật: ngụ ý của chứng viêm não. Neuropharmacology. 2014; 79 : 298–306. doi: 10.1016 / j.neuropharm.2013.11.004. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
86. Penkowa M, Espejo C, Martínez-Cáceres EM, Montalban X, Hidalgo J. Tăng quá trình khử men và tổn thương sợi trục ở chuột thiếu metallothionein I + II trong quá trình thực nghiệm viêm não tủy tự miễn. Khoa học cuộc sống của Cell Mol. Năm 2003; 60 : 185–197. doi: 10.1007 / s000180300013. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
87. Naito Y, Takagi T, Higashimura Y. Heme oxygenase-1 và các đại thực bào M2 chống viêm. Lý sinh hóa sinh Arch. 2014; 564 : 83–88. doi: 10.1016 / j.abb.2014.09.005. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
88. Pareek TK, Belkadi A, Kesavapany S, Zaremba A, Loh SL, Bai L, Cohen ML, Meyer C, Liby KT, Miller RH, Sporn MB, Letterio JJ. Triterpenoid điều chế biểu hiện IL-17 và Nrf-2 cải thiện tình trạng viêm thần kinh và thúc đẩy quá trình tái tạo myelin trong bệnh viêm cơ não tự miễn dịch. Đại diện khoa học 2011; 1 : 201. doi: 10.1038 / srep00201. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
89. Chora AA, Fontoura P, Cunha A, Pais TF, Cardoso S, Ho PP, Lee LY, Sobel RA, Steinman L, Soares MP. Heme oxygenase-1 và carbon monoxide ngăn chặn chứng viêm thần kinh tự miễn dịch. J Clin Đầu tư. Năm 2007; 117 : 438–47. doi: 10.1172 / JCI28844. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
90. Juknat A, Pietr M, Kozela E, Rimmerman N, Levy R, Coppola G, Geschwind D, Vogel Z. Các cấu hình phiên mã khác nhau qua trung gian tiếp xúc với cannabinoids cannabidiol và Δ9-tetrahydrocannabinol trong tế bào vi mô BV-2. Br J Pharmacol. 2012; 165 : 2512–2528. doi: 10.1111 / j.1476-5381.2011.01461.x. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
91. Burstein S. Cannabidiol (CBD) và các chất tương tự của nó: đánh giá tác dụng của chúng đối với chứng viêm. Bioorg Med Chem. Năm 2015; 23 : 1377–1385. doi: 10.1016 / j.bmc.2015.01.059. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
92. Cabral GA, Rogers TJ, Lichtman AH. Lật lá mới: điều chỉnh cannabinoid và endocannabinoid của chức năng miễn dịch. J Thuốc miễn dịch thần kinh. Năm 2015; 10 (2): 193–203. doi: 10.1007 / s11481-015-9615-z. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
93. Maresz K, Pryce G, Ponomarev ED, Marsicano G, Croxford JL, Shriver LP, Ledent C, Cheng X, Carrier EJ, Mann MK, Giovannoni G, Pertwee RG, Yamamura T, Buckley NE, Hillard CJ, Lutz B, Baker D, Dittel BN. Ức chế trực tiếp quá trình viêm tự miễn dịch thần kinh trung ương thông qua thụ thể cannabinoid CB1 trên tế bào thần kinh và CB2 trên tế bào T tự hoạt động. Nat Med. Năm 2007; 13 : 492–7. doi: 10.1038 / nm1561. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]

Kỷ nguyên mới cho nghiên cứu miễn dịch

Ayse Batova 1,2 * và James W Zapf 2

1 Khoa Nhi, Huyết học / Ung thư, Đại học California San Diego, Hoa Kỳ

1 Visionary Pharmaceuticals lnc., USA

* Tác giả tương ứng: Ayse Batova, Đại học California San Diego, Khoa Nhi, Huyết học / Ung thư, 200 W. Arbor Drive San Diego, CA 92103

Nhận: 08/08/2014; Được chấp nhận: 11 tháng 8, 2014; Xuất bản: 26 tháng 8, 2014

Biên tập

Đây thực sự là một thời điểm thú vị để nghiên cứu về miễn dịch học. Những khám phá nổi bật gần đây trên một số khía cạnh đang mở ra một thời đại mới của phương pháp trị liệu miễn dịch hứa hẹn rất nhiều với tiềm năng cung cấp các lựa chọn cho những bệnh nhân không có cơ hội. Những mặt trận này bao gồm những khám phá về lộ trình điểm kiểm tra miễn dịch protein-1 (PD-1) chết tế bào được lập trình, trục ROR γt-Th 17-IL-17 và vai trò của nó trong bệnh tự miễn, vai trò của cannabinoids và các thụ thể của chúng trong chứng viêm

Việc phát hiện ra PD-1 và phối tử của nó, PD-L1 và PD-L2, nhanh chóng dẫn đến nhận ra rằng các tế bào khối u sử dụng phối tử PD-1 để điều chỉnh phản ứng của tế bào T và thoát khỏi sự phát hiện và tấn công miễn dịch. Nhận thức này đến từ phát hiện ra rằng biểu hiện PD-L1 được phát hiện trong nhiều bệnh ung thư nhưng không phải ở các mô bình thường [1]. Hơn nữa, biểu hiện PD-L1 hoặc PD-L2 của các tế bào khối u được phát hiện có liên quan đến tiên lượng xấu hơn và giảm khả năng sống sót. Ở cả bệnh nhân ung thư phổi không tế bào nhỏ và ung thư tế bào hắc tố, mức độ PD-1 cao hơn được quan sát thấy trên các tế bào Lympho thâm nhiễm khối u (TIL) so với các tế bào lympho đang lưu hành [2]. Cuối cùng, có mối tương quan nghịch giữa biểu hiện PD-L2 của khối u và sự hiện diện của CD8 + TIL trong ung thư thực quản [3]. Tất cả những phát hiện này đã dẫn đến việc các công ty dược phẩm đổ xô phát triển các kháng thể đối với PD-1 hoặc các phối tử của nó để phong tỏa lộ trình trạm kiểm soát PD-1. Trong số các kháng thể này, nivolumab (Bristol-Myers Squibb), một kháng thể đơn dòng IgG4 hoàn toàn ở người chống lại PD-1, là loại tiên tiến nhất trong phòng khám. Trong nghiên cứu giai đoạn I, tỷ lệ đáp ứng khách quan là 31% trong thời gian trung bình là hai năm ở bệnh nhân ung thư hắc tố tiến triển [4]. Thời gian sống thêm trung bình ở những bệnh nhân được điều trị bằng nivolumab là 16,8 tháng, và tỷ lệ sống thêm 1 và 2 năm lần lượt là 62% và 43%. Trong một nghiên cứu khác với nivolumab được dùng đồng thời với Yervoy (kháng thể kháng CTLA-4) ở bệnh nhân u ác tính, tỷ lệ đáp ứng tổng thể là 53% đã được quan sát thấy [5]. Điều này cho thấy rằng hiệu quả thậm chí có thể cao hơn khi nhắm mục tiêu nhiều điểm kiểm tra trong khi các tác dụng phụ vẫn có thể kiểm soát được. Trạm kiểm soát PD-1 cũng đang được nhắm mục tiêu kết hợp với vắc xin và các liệu pháp miễn dịch khác để tối ưu hóa phản ứng lâm sàng. Tuy nhiên, vẫn còn những câu hỏi về việc nhắm mục tiêu trạm kiểm soát PD-1. Một câu hỏi quan trọng là liên quan đến cơ chế chịu trách nhiệm cho các phản ứng chống khối u ở những bệnh nhân có khối u âm tính với PDL-1.

Việc phát hiện ra tế bào Th17 và sinh học của chúng đã nâng cao đáng kể hiểu biết của chúng ta về cơ chế bệnh sinh của nhiều bệnh viêm nhiễm ở người, do đó mở ra một cơ hội mới cho sự phát triển của thế hệ tiếp theo của liệu pháp điều trị chống viêm. Sự tham gia của các tế bào Th17 và các cytokine IL-17A / F, IL-21 và IL-22 của chúng trong chứng viêm trở nên rõ ràng từ các nghiên cứu chứng minh sự hiện diện của một lượng lớn các tế bào này và các cytokine liên quan trong mô bệnh cũng như sự hiện diện của cao mức IL-17 trong huyết thanh của bệnh nhân mắc bệnh tự miễn so với người không mắc bệnh. Hơn nữa, các kháng thể với IL-17 có thể làm giảm bớt các dấu hiệu của bệnh ở một số mô hình động vật [6,7]. Kể từ những nghiên cứu ban đầu này, một số kháng thể nhắm mục tiêu IL-17A (AIN457, LY2439821), IL-17F, IL-17R và IL-23, đã đi vào thử nghiệm lâm sàng và cho đến nay đã cho thấy hiệu quả rõ rệt trong bệnh viêm khớp và bệnh vẩy nến [8- 10]. Tuy nhiên, đáng ngạc nhiên là việc nhắm mục tiêu IL-17 với các kháng thể đã cho thấy các kết quả khác nhau trong các mô hình động vật bị bệnh viêm ruột (IBD). Hơn nữa, kết quả từ các thử nghiệm lâm sàng của brodalumab (anti IL-17R) và secukinumab (anti IL-17A) trong bệnh Crohn không cải thiện được các triệu chứng bệnh, và thậm chí làm trầm trọng thêm bệnh ở một số bệnh nhân [11] cho thấy vai trò của tế bào Th17 và IL -17A dường như phức tạp hơn suy nghĩ ban đầu.

Việc phát hiện ra thụ thể hormone hạt nhân, RORγt, là cơ quan điều hòa chính của quá trình biệt hóa tế bào Th17 và tiết IL-17 cho thấy mục tiêu điều trị đối với các phân tử nhỏ chống lại trục IL-23 / IL-17. Không giống như các kháng thể nhắm vào các cytokine cụ thể, các chất đối kháng RORγt có thể làm giảm phổ đầy đủ của các cytokine liên quan đến Th17. Hơn nữa, các chất đối kháng của RORγt có nhiều khả năng làm giảm các cytokine liên quan đến Th17 hơn là ngăn chặn các cytokine này như đặc trưng của các kháng thể. Điều này sẽ cho phép một số mức độ hoạt động của IL-17 dường như cần thiết trong ruột để bảo vệ chống lại nhiễm nấm. Vì những lý do này, thuốc đối kháng RORγt có thể có hiệu quả khi liệu pháp kháng thể thất bại. Tiết lộ này đã dẫn đến một cuộc đua cạnh tranh cao giữa các công ty dược phẩm lớn và các công ty dược phẩm mới thành lập để phát triển các chất đối kháng phân tử nhỏ của RORγt. Cho đến nay, có rất nhiều chất đối kháng RORγt đang trong giai đoạn phát triển tiền lâm sàng và một loại do Orphagen và Japan Tobacco Inc. phát triển gần đây đã được đưa vào thử nghiệm lâm sàng. Các hợp chất này không chỉ cho thấy hoạt động ức chế chống lại sự biệt hóa tế bào Th17 và sản xuất IL-17, mà còn chứng minh mức độ hiệu quả khác nhau trong các mô hình bệnh vẩy nến và viêm não tự miễn thực nghiệm [12,13]. Các phân tử nhỏ tổng hợp dường như không phải là nguồn duy nhất của các chất đối kháng RORγt. Điều thú vị là thiên nhiên cũng đã tạo ra các phân tử có hiệu quả đối kháng với RORγt. Gần đây, sản phẩm tự nhiên, axit ursolic (UA), đã được phát hiện có tác dụng ức chế chọn lọc và hiệu quả chức năng của RORγt, dẫn đến giảm đáng kể biểu hiện IL-17 ở cả tế bào Th17 đang phát triển và biệt hóa [14]. Hơn nữa, điều trị viêm não tủy tự miễn thực nghiệm được cải thiện UA do đó cho thấy UA có thể là một ứng cử viên thuốc hoặc hợp chất dẫn đầu có giá trị để phát triển các phương pháp điều trị cho các bệnh viêm và ung thư qua trung gian Th17. Dựa trên những phát hiện này, rất gần đây, Đại học California Davis phối hợp với Visionary Pharmaceuticals đã bắt đầu thử nghiệm lâm sàng UA để điều trị viêm đường mật xơ cứng nguyên phát. Các kết quả của thử nghiệm này đang được mong đợi giống như kết quả từ các thử nghiệm sắp tới về chất đối kháng RORγt tổng hợp trong giai đoạn phát triển tiền lâm sàng. Đại học California Davis phối hợp với Visionary Pharmaceuticals đã bắt đầu thử nghiệm lâm sàng UA để điều trị viêm đường mật xơ cứng nguyên phát. Các kết quả của thử nghiệm này đang được mong đợi giống như kết quả từ các thử nghiệm sắp tới về chất đối kháng RORγt tổng hợp trong giai đoạn phát triển tiền lâm sàng. Đại học California Davis phối hợp với Visionary Pharmaceuticals đã bắt đầu thử nghiệm lâm sàng UA để điều trị viêm đường mật xơ cứng nguyên phát. Các kết quả của thử nghiệm này đang được mong đợi giống như kết quả từ các thử nghiệm sắp tới về chất đối kháng RORγt tổng hợp trong giai đoạn phát triển tiền lâm sàng.

Biên giới thứ ba của những tiến bộ quan trọng gần đây bao gồm những phát triển quan trọng trong dược lý cannabinoid kể từ khi phát hiện ra các thụ thể cannabinoid, CB1 và CB2. Những phát triển này bao gồm các hoạt động của cannabinoids và các đối tác nội sinh của chúng, các endocannabinoids về điều hòa miễn dịch. Các cannabinoids ngoại sinh đã được chứng minh là ngăn chặn các phản ứng miễn dịch qua trung gian tế bào T chủ yếu bằng cách gây ra quá trình apoptosis và ức chế các cytokine và chemokine gây viêm trong khi tăng các cytokine chống viêm. Ví dụ, cannabinoid tự nhiên, 9-Tetrahydrocannabinol (THC), được tìm thấy để gây ra quá trình chết rụng ở các tế bào lách ngây thơ và được kích hoạt bởi mitogen trong ống nghiệm và những tác dụng do THC gây ra này có thể bị ức chế bởi các chất đối kháng CB2 [15]. Trong nghiên cứu con người, Các đại thực bào phế nang phổi bị loại bỏ khỏi những người hút cần sa bị ảnh hưởng đến khả năng sản xuất TNF, yếu tố kích thích tế bào hạt / đại thực bào và IL-6 để đáp ứng với kích thích LPS [16]. Các nghiên cứu in vitro khác gần đây cũng cho thấy tác dụng chống viêm mạnh mẽ của cannabinoids tổng hợp CP55,940 và WIN55,212-2. Cả CP55, 940 và WIN55, 212-2 đều giảm sản xuất cytokine IL-6 và IL-8 được điều chỉnh từ các tế bào hoạt dịch giống nguyên bào sợi thấp được kích thích bởi IL-1β, thông qua cơ chế trung gian không phải CB1 / CB2 [17]. Hơn nữa, một số loại này và các loại cannabinoid tổng hợp khác đã cho thấy hiệu quả trên nhiều loại mô hình động vật [18]. Ví dụ, trong một nghiên cứu, ứng dụng ACEA trong phúc mạc, một chất chủ vận chọn lọc CB1, và JWH-133, một chất chủ vận chọn lọc CB2, dầu ức chế viêm đại tràng do mù tạt và các triệu chứng sau đó như tăng trọng lượng ruột kết xa, co thắt ruột kết, tổn thương viêm, tiêu chảy và tổn thương mô học [19]. Kết quả từ những nghiên cứu này và các nghiên cứu tương tự đã thúc đẩy việc bắt đầu các thử nghiệm lâm sàng để điều trị các bệnh viêm nhiễm. Một thử nghiệm thí điểm về cần sa giàu THC dưới dạng thuốc lá trong 8 tuần đã chứng minh những lợi ích lâm sàng đáng kể so với giả dược ở những bệnh nhân bị bệnh Crohn không đáp ứng với liệu pháp điều trị bằng steroid, chất điều hòa miễn dịch hoặc các tác nhân chống hoại tử khối u [20 ]. Hiện tại, một số cannabinoid tổng hợp đang được phát triển lâm sàng bao gồm Resumab Kết quả từ những nghiên cứu này và các nghiên cứu tương tự đã thúc đẩy việc bắt đầu các thử nghiệm lâm sàng để điều trị các bệnh viêm nhiễm. Một thử nghiệm thí điểm về cần sa giàu THC dưới dạng thuốc lá trong 8 tuần đã chứng minh những lợi ích lâm sàng đáng kể so với giả dược ở những bệnh nhân bị bệnh Crohn không đáp ứng với liệu pháp điều trị bằng steroid, chất điều hòa miễn dịch hoặc các tác nhân chống hoại tử khối u [20 ]. Hiện tại, một số cannabinoid tổng hợp đang được phát triển lâm sàng bao gồm Resumab Kết quả từ những nghiên cứu này và các nghiên cứu tương tự đã thúc đẩy việc bắt đầu các thử nghiệm lâm sàng để điều trị các bệnh viêm nhiễm. Một thử nghiệm thí điểm về cần sa giàu THC dưới dạng thuốc lá trong 8 tuần đã chứng minh những lợi ích lâm sàng đáng kể so với giả dược ở những bệnh nhân bị bệnh Crohn không đáp ứng với liệu pháp điều trị bằng steroid, chất điều hòa miễn dịch hoặc các tác nhân chống hoại tử khối u [20 ]. Hiện tại, một số cannabinoid tổng hợp đang được phát triển lâm sàng bao gồm ResumabTM bởi Corbus Pharmaceuticals cho các bệnh viêm hiếm gặp.

Rõ ràng là từ cả nghiên cứu in vitro và in vivo rằng cannabinoids có tác dụng chống viêm mạnh, phụ thuộc và độc lập với CB1 và CB2. Mặc dù người ta đã biết nhiều về tác dụng của cannabinoids đối với tế bào Th1 và chức năng của chúng, nhưng có rất ít hoặc không có thông tin về tác động của cannabinoids đối với tế bào NK, cũng như tế bào Th17 và Treg, sự cân bằng của chúng, là yếu tố quyết định nghiêm trọng đến tình trạng viêm.

Người giới thiệu

  1. Dong H, Strome SE, Salomao DR, Tamura H, Hirano F, Flies DB, et al. B7-H1 liên quan đến khối u thúc đẩy quá trình tự chết của tế bào T: một cơ chế trốn tránh miễn dịch tiềm năng. Nat Med. Năm 2002; 8: 793-800.
  2. Blank C, Kuball J, Voelkl S, Wiendl H, Becker B, Walter B, et al. Phong tỏa PD-L1 (B7-H1) làm tăng phản ứng của tế bào T đặc hiệu với khối u ở người trong ống nghiệm. Int J Cancer. Năm 2006; 119: 317-327.
  3. Rozali EN, Hato SV, Robinson BW, Lake RA, Lesterhuis WJ. Lập trình phối tử tử 2 trong ức chế miễn dịch do ung thư. Clin Dev Immunol. 2012.
  4. Topalian SL, Hodi FS, Brahmer JR, Gettinger SN, Smith DC, McDermott DF, et al. Tương quan an toàn, hoạt động và miễn dịch của kháng thể chống PD-1 trong bệnh ung thư. N Engl J Med. 2012; 366: 2443-2454.
  5. Srivastava N, McDermott D. Cập nhật về lợi ích của liệu pháp miễn dịch và liệu pháp nhắm mục tiêu trong u ác tính: bối cảnh đang thay đổi. Ung thư Manag Res. 2014; 6: 279-289.
  6. Miossec P, Kolls JK. Nhắm mục tiêu tế bào IL-17 và TH17 trong tình trạng viêm mãn tính. Nat Rev Ma túy Discov. 2012; 11: 763-776.
  7. Fitzpatrick LR. Ức chế IL-17 như một phương pháp tiếp cận dược lý đối với IBD. Int Rev Immunol. Năm 2013; 32: 544-555.
  8. Hueber W, Patel DD, Dryja T, Wright AM, Koroleva I, Bruin G, et al. Tác dụng của AIN457, một kháng thể hoàn toàn của con người đối với interleukin-17A, đối với bệnh vẩy nến, viêm khớp dạng thấp và viêm màng bồ đào. Khoa học dịch thuật Med. Năm 2010; 2: 52-72.
  9. Genovese MC, Van den Bosch F, Roberson SA, Bojin S, Biagini IM, Ryan P, et al. LY2439821, một kháng thể đơn dòng kháng interleukin-17 được nhân bản hóa, trong điều trị bệnh nhân viêm khớp dạng thấp: Một nghiên cứu ngẫu nhiên, mù đôi, có đối chứng với giả dược, giai đoạn I. Viêm khớp Thấp khớp. Năm 2010; 62: 929-939.
  10. Papp KA, Leonardi C, Cố vấn A, Ortonne JP, Krueger JG, Kricorian G, et al. Brodalumab, một kháng thể chống thụ thể interleukin-17 cho bệnh vẩy nến. N Engl J Med. 2012; 366: 1181-1189.
  11. Hueber W, Sands BE, Lewitzky S, Vandemeulebroecke M, Reinisch W, Higgins PDR, et al. Secukinumab, một kháng thể đơn dòng kháng IL-17A ở người, cho bệnh Crohn từ trung bình đến nặng: kết quả bất ngờ của một thử nghiệm ngẫu nhiên, mù đôi có đối chứng với giả dược. Ruột. 2012; 61: 1693–700.
  12. Chang MR, Lyda B, Kamenecka TM, Griffin PR. Dược lý ức chế thụ thể hạt nhân mồ côi liên quan đến thụ thể axit retinoic? Là phương pháp điều trị trong mô hình thử nghiệm viêm khớp do collagen. Viêm khớp Rheumatol Hoboken NJ. 2014; 66: 579–588.
  13. Skepner J, Ramesh R, Trocha M, Schmidt D, Baloglu E, Lobera M, et al. Sự ức chế dược lý đối với RORt điều chỉnh sự biểu hiện gen chữ ký Th17 và ngăn chặn tình trạng viêm da in vivo. J Immunol. 2014; 192: 2564-2575.
  14. Xu T, Wang X, Zhong B, Nurieva RI, Ding S, Dong C. Axit ursolic ngăn chặn interleukin-17 (T1, Wang X, Zhong B, Nurieva RI, Ding S, Đông C. Axit ursolic ngăn chặn interleukin-17 (IL -17) sản xuất bằng cách đối kháng chọn lọc chức năng của protein RORgamma t. J Biol Chem. 2011; 286: 22707-22710.
  15. McKallip RJ, Lombard C, Martin BR, Nagarkatti M, Nagarkatti PS. Quá trình apoptosis do Delta (9) -tetrahydrocannabinol gây ra ở tuyến ức và lá lách như một cơ chế ức chế miễn dịch in vitro và in vivo. J Pharmacol Exp Ther. Năm 2002; 302: 451-465.
  16. Baldwin GC, Tashkin DP, Buckley DM, Park AN, Dubinett SM, Roth MD. Cần sa và cocaine làm suy giảm chức năng của đại thực bào phế nang và sản xuất cytokine. Am J Respir Crit Care Med. Năm 1997; 156: 1606-1613.
  17. Selvi E, Lorenzini S, Garcia Gonzalez E, Maggio R, Lazzerini PE, Capecchi PL, et al. Tác dụng ức chế của cannabinoids tổng hợp trên sản xuất cytokine trong các tế bào hoạt dịch giống nguyên bào sợi dạng thấp. Clin Exp Rheumatol. Năm 2008; 26: 574-581.
  18. Nagarkatti P, Pandey R, Rieder SA, Hegde VL, Nagarkatti M. Cannabinoids làm thuốc chống viêm mới. Med Chem trong tương lai. Năm 2009; 1: 1333-1349.
  19. Kimball ES, Schneider CR, Wallace NH, Hornby PJ. Thuốc đồng vận của thụ thể cannabinoid 1 và 2 ức chế chứng viêm đại tràng thực nghiệm do dầu mù tạt và dextran sulfat natri gây ra. Am J Physiol Thuốc tiêu hóa gan Physiol. Năm 2006; 291: 364–371.
  20. Naftali T, Bar-Lev Schleider L, Dotan I, Lansky EP, Sklerovsky Benjaminov F, Konikoff FM, et al. Cần sa gây ra phản ứng lâm sàng ở bệnh nhân mắc bệnh Crohn: một nghiên cứu tiền cứu có đối chứng với giả dược. Clin Gastroenterol Hepatol Tắt Clin Pract J Am Gastroenterol PGS.TS. Năm 2013; 11: 1276–1280.

 

In this article