Liệu pháp điều trị ung thư bằng cách ức chế điều hòa miễn dịch tiêu cực bằng việc phong tỏa CTLA-4 và PD-1 1

Liệu pháp điều trị ung thư bằng cách ức chế điều hòa miễn dịch tiêu cực bằng việc phong tỏa CTLA-4 và PD-1

Giải Nobel Sinh lý học hoặc Y học 2018 © Nobel Media AB. Ảnh: A. Mahmoud James P. Allison Phần thưởng: 1/2 © Nobel Media AB. Ảnh: A. Mahmoud Tasuku Honjo Phần thưởng: 1/2 Xem thêm: Thuốc trị cúm có thể ngăn chặn di căn ung thưKỳ diệu bài thuốc chữa ung thư gan từ thịt cóc, …   Read More

Giải Nobel Sinh lý học hoặc Y học 2018

Giải Nobel Sinh lý học hoặc Y học 2018 đã được trao chung cho James P. Allison và Tasuku Honjo “vì đã khám phá ra liệu pháp điều trị ung thư bằng cách ức chế điều hòa miễn dịch tiêu cực.”

Để trích dẫn phần này
theo kiểu MLA: Giải Nobel Sinh lý học hoặc Y học 2018. NobelPrize.org. Nobel Media AB 2020. Thứ ba. Ngày 8 tháng 9 năm 2020. <https://www.nobelprize.org/prizes/medicine/2018/summary/>
Trở lại đầu trang

Tìm hiểu thêm

Giải thưởng Nobel 2019

Mười lăm người đoạt giải thưởng đã được trao vào năm 2019, cho những thành tựu mang lại lợi ích lớn nhất cho nhân loại.

Công việc và khám phá của họ bao gồm từ cách các tế bào thích ứng với những thay đổi về mức độ oxy đến khả năng chống lại đói nghèo toàn cầu của chúng ta.

Xem tất cả chúng được trình bày ở đây.

Người đoạt giải Nobel 2019

Khám phá các giải thưởng và danh hiệu

Tìm kiếm những giải thưởng nổi tiếng và những người đoạt giải trong các lĩnh vực khác nhau và khám phá lịch sử của Giải Nobel.

Công bố giải thưởng

Giáo sư Thomas Perlmann, Thư ký Ủy ban Nobel Sinh lý và Y học, đã công bố Giải Nobel Y học năm 2018 vào ngày 1 tháng 10 năm 2018.

Phỏng vấn về tác phẩm được trao giải

“Chúng ta có thể chữa khỏi ung thư bằng nó”

Klas Kärre, thành viên của Ủy ban Nobel, về khả năng thay đổi cuộc đời của khám phá được trao giải Nobel năm nay. Giáo sư Kärre, thành viên của Ủy ban Nobel Sinh lý học hoặc Y học, đã được phỏng vấn bởi nhà báo tự do Lotta Fredholm sau khi công bố Giải Nobel Y học hoặc Sinh lý học 2018.

Thông cáo báo chí: Giải Nobel Y học hoặc Sinh lý học 2018

 

TÓM LƯỢC

Ung thư giết chết hàng triệu người mỗi năm và là một trong những thách thức sức khỏe lớn nhất của nhân loại. Bằng cách kích thích khả năng vốn có của hệ thống miễn dịch của chúng ta để tấn công các tế bào khối u, những người đoạt giải Nobel năm nay đã thiết lập một nguyên tắc hoàn toàn mới cho liệu pháp điều trị ung thư.

James P. Allison đã nghiên cứu một loại protein được biết đến có chức năng như một cái phanh trên hệ thống miễn dịch. Ông nhận ra tiềm năng giải phóng phanh và do đó giải phóng các tế bào miễn dịch của chúng ta để tấn công khối u. Sau đó, ông đã phát triển khái niệm này thành một cách tiếp cận hoàn toàn mới để điều trị bệnh nhân.

Song song đó, Tasuku Honjo đã phát hiện ra một loại protein trên các tế bào miễn dịch và sau khi thăm dò cẩn thận chức năng của nó, cuối cùng tiết lộ rằng nó cũng hoạt động như một cái phanh, nhưng với một cơ chế hoạt động khác. Các liệu pháp dựa trên khám phá của ông được chứng minh là có hiệu quả rõ rệt trong cuộc chiến chống ung thư.

Allison và Honjo đã chỉ ra cách các chiến lược khác nhau để ức chế hệ thống miễn dịch có thể được sử dụng trong điều trị ung thư. Những khám phá tinh tế của hai Laureates tạo thành một bước ngoặt trong cuộc chiến chống lại bệnh ung thư của chúng tôi.

Có thể bảo vệ miễn dịch của chúng ta được tham gia để điều trị ung thư không?

Ung thư bao gồm nhiều bệnh khác nhau, tất cả đều được đặc trưng bởi sự tăng sinh không kiểm soát của các tế bào bất thường có khả năng lây lan đến các cơ quan và mô khỏe mạnh. Một số phương pháp điều trị có sẵn để điều trị ung thư, bao gồm phẫu thuật, bức xạ và các chiến lược khác, một số phương pháp đã được trao giải Nobel trước đây. Chúng bao gồm các phương pháp điều trị hormone cho ung thư tuyến tiền liệt (Huggins, 1966), hóa trị liệu (Elion và Hitchings, 1988), và cấy ghép tủy xương cho bệnh bạch cầu (Thomas 1990). Tuy nhiên, ung thư giai đoạn muộn vẫn vô cùng khó điều trị và rất cần các chiến lược điều trị mới.

Vào cuối thế kỷ 19 và đầu thế kỷ 20, khái niệm đã xuất hiện rằng việc kích hoạt hệ thống miễn dịch có thể là một chiến lược để tấn công các tế bào khối u. Các nỗ lực đã được thực hiện để lây nhiễm vi khuẩn cho bệnh nhân để kích hoạt hệ thống phòng thủ. Những nỗ lực này chỉ mang lại hiệu quả khiêm tốn, nhưng một biến thể của chiến lược này ngày nay được sử dụng trong điều trị ung thư bàng quang. Người ta nhận ra rằng cần phải có nhiều kiến thức hơn. Nhiều nhà khoa học đã tham gia vào nghiên cứu cơ bản căng thẳng và khám phá ra các cơ chế cơ bản điều chỉnh khả năng miễn dịch và cũng chỉ ra cách hệ thống miễn dịch có thể nhận ra các tế bào ung thư. Bất chấp những tiến bộ khoa học đáng chú ý, những nỗ lực phát triển các chiến lược mới có thể tổng quát chống lại bệnh ung thư tỏ ra khó khăn.

Bộ tăng tốc và phanh trong hệ thống miễn dịch của chúng ta

Đặc tính cơ bản của hệ thống miễn dịch của chúng ta là khả năng phân biệt “tự ngã” với “vô ngã” để vi khuẩn, vi rút xâm nhập và các mối nguy hiểm khác có thể bị tấn công và loại bỏ. Tế bào T, một loại tế bào bạch cầu, đóng vai trò quan trọng trong quá trình phòng thủ này. Tế bào T được chứng minh là có các thụ thể liên kết với các cấu trúc được công nhận là vô ngã và những tương tác như vậy kích hoạt hệ thống miễn dịch tham gia vào việc bảo vệ. Nhưng các protein bổ sung hoạt động như máy gia tốc tế bào T cũng được yêu cầu để kích hoạt phản ứng miễn dịch toàn diện (xem Hình). Nhiều nhà khoa học đã đóng góp vào nghiên cứu cơ bản quan trọng này và xác định các protein khác có chức năng như phanh hãm tế bào T, ức chế kích hoạt miễn dịch. Sự cân bằng phức tạp giữa chân ga và phanh là điều cần thiết để kiểm soát chặt chẽ.

Một nguyên tắc mới cho liệu pháp miễn dịch

Trong những năm 1990, trong phòng thí nghiệm của mình tại Đại học California, Berkeley, James P. Allison đã nghiên cứu về protein CTLA-4 của tế bào T. Ông là một trong số các nhà khoa học đã đưa ra nhận xét rằng CTLA-4 có chức năng như một phanh hãm tế bào T. Các nhóm nghiên cứu khác đã khai thác cơ chế này như một mục tiêu trong điều trị bệnh tự miễn dịch. Allison, tuy nhiên, có một ý tưởng hoàn toàn khác. Ông đã phát triển một kháng thể có thể liên kết với CTLA-4 và ngăn chặn chức năng của nó (xem Hình). Giờ đây, ông bắt đầu điều tra xem liệu phong tỏa CTLA-4 có thể ngắt phanh tế bào T và giải phóng hệ thống miễn dịch tấn công các tế bào ung thư hay không. Allison và các đồng nghiệp đã thực hiện một thí nghiệm đầu tiên vào cuối năm 1994, và trong sự phấn khích của họ, nó ngay lập tức được lặp lại trong kỳ nghỉ Giáng sinh. Kết quả thật ngoạn mục. Những con chuột mắc bệnh ung thư đã được chữa khỏi bằng cách điều trị bằng các kháng thể ức chế phanh và mở khóa hoạt động của tế bào T chống khối u. Mặc dù có rất ít sự quan tâm từ ngành dược phẩm, Allison vẫn tiếp tục nỗ lực phát triển chiến lược này thành một liệu pháp cho con người. Các kết quả đầy hứa hẹn đã sớm xuất hiện từ một số nhóm, và vào năm 2010, một nghiên cứu lâm sàng quan trọng đã cho thấy những tác dụng nổi bật ở những bệnh nhân bị u ác tính tiến triển, một loại ung thư da. Ở một số bệnh nhân, các dấu hiệu ung thư còn lại đã biến mất. Những kết quả đáng chú ý như vậy chưa từng thấy trước đây ở nhóm bệnh nhân này. và vào năm 2010, một nghiên cứu lâm sàng quan trọng đã cho thấy những tác dụng nổi bật ở những bệnh nhân bị ung thư hắc tố giai đoạn cuối, một loại ung thư da. Ở một số bệnh nhân, các dấu hiệu ung thư còn lại đã biến mất. Những kết quả đáng chú ý như vậy chưa từng thấy trước đây ở nhóm bệnh nhân này. và vào năm 2010, một nghiên cứu lâm sàng quan trọng đã cho thấy những tác dụng nổi bật ở những bệnh nhân bị ung thư hắc tố giai đoạn cuối, một loại ung thư da. Ở một số bệnh nhân, các dấu hiệu ung thư còn lại đã biến mất. Những kết quả đáng chú ý như vậy chưa từng thấy trước đây ở nhóm bệnh nhân này.

Liệu pháp điều trị ung thư bằng cách ức chế điều hòa miễn dịch tiêu cực bằng việc phong tỏa CTLA-4 và PD-1 6

Hình: Phía trên bên trái: Việc kích hoạt các tế bào T yêu cầu thụ thể tế bào T liên kết với các cấu trúc trên các tế bào miễn dịch khác được công nhận là “vô ngã”. Một protein hoạt động như một chất xúc tiến tế bào T cũng cần thiết để kích hoạt tế bào T. CTLA- 4 có chức năng hãm các tế bào T ức chế chức năng của chân ga. Phía dưới bên trái: Các kháng thể (màu xanh lá cây) chống lại CTLA-4 ngăn chặn chức năng của phanh dẫn đến kích hoạt tế bào T và tấn công tế bào ung thưPhía trên bên phải: PD-1 là một phanh tế bào T khác ức chế sự hoạt hóa của tế bào T. Phía dưới bên phải: Các kháng thể chống lại PD-1 ức chế chức năng của phanh dẫn đến kích hoạt các tế bào T và tấn công hiệu quả cao vào các tế bào ung thư.

Khám phá về PD-1 và tầm quan trọng của nó đối với liệu pháp điều trị ung thư

Năm 1992, vài năm trước khi Allison phát hiện ra, Tasuku Honjo đã phát hiện ra PD-1, một loại protein khác được biểu hiện trên bề mặt tế bào T. Quyết tâm làm sáng tỏ vai trò của nó, ông đã khám phá một cách tỉ mỉ chức năng của nó trong một loạt các thí nghiệm tao nhã được thực hiện trong nhiều năm trong phòng thí nghiệm của ông tại Đại học Kyoto. Kết quả cho thấy PD-1, tương tự như CTLA-4, hoạt động như một phanh tế bào T, nhưng hoạt động theo một cơ chế khác (xem Hình). Trong các thí nghiệm trên động vật, phong tỏa PD-1 cũng được chứng minh là một chiến lược đầy hứa hẹn trong cuộc chiến chống ung thư, như Honjo và các nhóm khác đã chứng minh. Điều này đã mở đường cho việc sử dụng PD-1 như một mục tiêu trong điều trị bệnh nhân. Sự phát triển lâm sàng sau đó, và vào năm 2012, một nghiên cứu quan trọng đã chứng minh hiệu quả rõ ràng trong điều trị bệnh nhân mắc các loại ung thư khác nhau. Kết quả thật ấn tượng,

Liệu pháp điểm kiểm tra miễn dịch cho bệnh ung thư hiện nay và trong tương lai

Sau các nghiên cứu ban đầu cho thấy tác dụng của phong tỏa CTLA-4 và PD-1, diễn biến lâm sàng đã rất ấn tượng. Bây giờ chúng ta biết rằng phương pháp điều trị, thường được gọi là “liệu pháp điểm kiểm tra miễn dịch”, về cơ bản đã thay đổi kết quả cho một số nhóm bệnh nhân ung thư giai đoạn cuối. Tương tự như các liệu pháp điều trị ung thư khác, các tác dụng phụ có thể nhận thấy, có thể nghiêm trọng và thậm chí đe dọa tính mạng. Chúng là do phản ứng miễn dịch hoạt động quá mức dẫn đến phản ứng tự miễn dịch, nhưng thường có thể kiểm soát được. Nghiên cứu liên tục chuyên sâu tập trung vào việc làm sáng tỏ các cơ chế hoạt động, với mục đích cải thiện các liệu pháp và giảm tác dụng phụ.

Trong số hai chiến lược điều trị, liệu pháp điểm kiểm tra chống lại PD-1 đã chứng minh hiệu quả hơn và kết quả tích cực đang được quan sát thấy ở một số loại ung thư, bao gồm ung thư phổi, ung thư thận, ung thư hạch và u ác tính. Các nghiên cứu lâm sàng mới chỉ ra rằng liệu pháp kết hợp, nhắm mục tiêu cả CTLA-4 và PD-1, thậm chí có thể hiệu quả hơn, như đã được chứng minh ở những bệnh nhân bị u ác tính. Do đó, Allison và Honjo đã truyền cảm hứng cho những nỗ lực kết hợp các chiến lược khác nhau để giải phóng hệ thống miễn dịch với mục đích loại bỏ tế bào khối u hiệu quả hơn. Một số lượng lớn các thử nghiệm liệu pháp trạm kiểm soát hiện đang được tiến hành chống lại hầu hết các loại ung thư và các protein trạm kiểm soát mới đang được thử nghiệm làm mục tiêu.

Trong hơn 100 năm, các nhà khoa học đã cố gắng tham gia vào hệ thống miễn dịch trong cuộc chiến chống lại bệnh ung thư. Cho đến khi khám phá ra tinh thể của hai người đoạt giải, tiến trình phát triển lâm sàng còn khiêm tốn. Liệu pháp điểm kiểm tra hiện đã tạo ra một cuộc cách mạng trong điều trị ung thư và đã thay đổi cơ bản cách chúng ta nhìn nhận về cách quản lý ung thư.

Các ấn phẩm chính

Ishida, Y., Agata, Y., Shibahara, K., & Honjo, T. (1992). Cảm ứng biểu hiện của PD-1, một thành viên mới của siêu họ gen immunoglobulin, khi tế bào chết theo chương trình. EMBO J. , 11 (11), 3887–3895.

Leach, DR, Krummel, MF, & Allison, JP (1996). Tăng cường khả năng miễn dịch chống khối u bằng cách phong tỏa CTLA-4. Khoa học , 271 (5256), 1734–1736.

Kwon, ED, Hurwitz, AA, Foster, BA, Madias, C., Feldhaus, AL, Greenberg, NM, Burg, MB & Allison, JP (1997). Thao tác các tín hiệu kích thích và ức chế tế bào T để điều trị miễn dịch ung thư tuyến tiền liệt. Proc Natl Acad Sci Hoa Kỳ , 94 (15), 8099–8103.

Nishimura, H., Nose, M., Hiai, H., Minato, N., & Honjo, T. (1999). Sự phát triển của các bệnh tự miễn dịch giống Lupus do sự gián đoạn của gen PD-1 mã hóa một thụ thể miễn dịch mang motif ITIM. Miễn dịch , 11 , 141–151.

Freeman, GJ, Long, AJ, Iwai, Y., Bourque, K., Chernova, T., Nishimura, H., Fitz, LJ, Malenkovich, N., Okazaki, T., Byrne, MC, Horton, HF, Fouser, L., Carter, L., Ling, V., Bowman, MR, Carreno, BM, Collins, M., Wood, CR & Honjo, T. (2000). Sự tham gia của thụ thể ức chế miễn dịch PD-1 của một thành viên gia đình B7 mới dẫn đến điều hòa tiêu cực về hoạt hóa tế bào lympho. J Exp Med , 192 (7), 1027–1034.

Hodi, FS, Mihm, MC, Soiffer, RJ, Haluska, FG, Butler, M., Seiden, MV, Davis, T., Henry-Spiers, R., MacRae, S., Willman, A., Padera, R ., Jaklitsch, MT, Shankar, S., Chen, TC, Korman, A., Allison, JP & Dranoff, G. (2003). Hoạt tính sinh học của phong tỏa kháng thể kháng nguyên 4 liên quan đến tế bào lympho T gây độc tế bào ở những bệnh nhân ung thư biểu mô tế bào hắc tố di căn và ung thư biểu mô buồng trứng đã được tiêm chủng trước đó. Proc Natl Acad Sci Hoa Kỳ , 100 (8), 4712-4717.

Iwai, Y., Terawaki, S., & Honjo, T. (2005). Phong tỏa PD-1 ức chế sự lây lan qua đường máu của các tế bào khối u sinh miễn dịch kém bằng cách tăng cường tuyển dụng các tế bào T tác động. Int Immunol , 17 (2), 133–144.

James P. Allison sinh năm 1948 tại Alice, Texas, Hoa Kỳ. Ông nhận bằng Tiến sĩ năm 1973 tại Đại học Texas, Austin. Từ năm 1974-1977, ông là nghiên cứu sinh sau tiến sĩ tại Quỹ Nghiên cứu và Phòng khám Scripps, La Jolla, California. Từ năm 1977-1984, ông là giảng viên của Trung tâm Ung thư Hệ thống Đại học Texas, Smithville, Texas; từ 1985-2004 tại Đại học California, Berkeley và từ 2004-2012 tại Trung tâm Ung thư Memorial Sloan-Kettering, New York. Từ năm 1997-2012, ông là Điều tra viên tại Viện Y tế Howard Hughes. Từ năm 2012, ông là Giáo sư tại Trung tâm Ung thư MD Anderson của Đại học Texas, Houston, Texas và có liên kết với Viện Liệu pháp Miễn dịch Ung thư Parker.

Tasuku Honjo sinh năm 1942 tại Kyoto, Nhật Bản. Năm 1966, ông trở thành MD, và từ năm 1971-1974, ông là nghiên cứu viên tại Hoa Kỳ tại Viện Carnegie của Washington, Baltimore và tại Viện Y tế Quốc gia, Bethesda, Maryland. Ông nhận bằng Tiến sĩ năm 1975 tại Đại học Kyoto. Từ năm 1974-1979, ông là giảng viên tại Đại học Tokyo và từ năm 1979-1984 tại Đại học Osaka. Từ năm 1984, ông là Giáo sư tại Đại học Kyoto. Ông là Chủ nhiệm Khoa từ năm 1996-2000 và từ năm 2002-2004 tại Đại học Kyoto.

Hình minh họa: © Ủy ban Nobel về Sinh lý học hoặc Y học. Người minh họa: Mattias Karlén


Hội đồng Nobel, bao gồm 50 giáo sư tại Karolinska Institutet, trao giải Nobel Sinh lý học hoặc Y học. Ủy ban Nobel của nó đánh giá các đề cử. Kể từ năm 1901, giải Nobel đã được trao cho những nhà khoa học đã có những khám phá quan trọng nhất vì lợi ích của nhân loại.

Nghiên cứu thêm

Kỷ nguyên mới cho nghiên cứu miễn dịch

Ayse Batova 1,2 * và James W Zapf 2

1 Khoa Nhi, Huyết học / Ung thư, Đại học California San Diego, Hoa Kỳ

1 Visionary Pharmaceuticals lnc., USA

* Tác giả tương ứng: Ayse Batova, Đại học California San Diego, Khoa Nhi, Huyết học / Ung thư, 200 W. Arbor Drive San Diego, CA 92103

Nhận: 08/08/2014; Được chấp nhận: 11 tháng 8, 2014; Xuất bản: 26 tháng 8, 2014

Biên tập

Đây thực sự là một thời điểm thú vị để nghiên cứu về miễn dịch học. Những khám phá nổi bật gần đây trên một số khía cạnh đang mở ra một thời đại mới của phương pháp trị liệu miễn dịch hứa hẹn rất nhiều với tiềm năng cung cấp các lựa chọn cho những bệnh nhân không có cơ hội. Những mặt trận này bao gồm những khám phá về lộ trình điểm kiểm tra miễn dịch protein-1 (PD-1) chết tế bào được lập trình, trục ROR γt-Th 17-IL-17 và vai trò của nó trong bệnh tự miễn, vai trò của cannabinoids và các thụ thể của chúng trong chứng viêm

Việc phát hiện ra PD-1 và phối tử của nó, PD-L1 và PD-L2, nhanh chóng dẫn đến nhận ra rằng các tế bào khối u sử dụng phối tử PD-1 để điều chỉnh phản ứng của tế bào T và thoát khỏi sự phát hiện và tấn công miễn dịch. Nhận thức này đến từ phát hiện ra rằng biểu hiện PD-L1 được phát hiện trong nhiều bệnh ung thư nhưng không phải ở các mô bình thường [1]. Hơn nữa, biểu hiện PD-L1 hoặc PD-L2 của các tế bào khối u được phát hiện có liên quan đến tiên lượng xấu hơn và giảm khả năng sống sót. Ở cả bệnh nhân ung thư phổi không tế bào nhỏ và ung thư tế bào hắc tố, mức độ PD-1 cao hơn được quan sát thấy trên các tế bào Lympho thâm nhiễm khối u (TIL) so với các tế bào lympho đang lưu hành [2]. Cuối cùng, có mối tương quan nghịch giữa biểu hiện PD-L2 của khối u và sự hiện diện của CD8 + TIL trong ung thư thực quản [3]. Tất cả những phát hiện này đã dẫn đến việc các công ty dược phẩm đổ xô phát triển các kháng thể đối với PD-1 hoặc các phối tử của nó để phong tỏa lộ trình trạm kiểm soát PD-1. Trong số các kháng thể này, nivolumab (Bristol-Myers Squibb), một kháng thể đơn dòng IgG4 hoàn toàn ở người chống lại PD-1, là loại tiên tiến nhất trong phòng khám. Trong nghiên cứu giai đoạn I, tỷ lệ đáp ứng khách quan là 31% trong thời gian trung bình là hai năm ở bệnh nhân ung thư hắc tố tiến triển [4]. Thời gian sống thêm trung bình ở những bệnh nhân được điều trị bằng nivolumab là 16,8 tháng, và tỷ lệ sống thêm 1 và 2 năm lần lượt là 62% và 43%. Trong một nghiên cứu khác với nivolumab được dùng đồng thời với Yervoy (kháng thể kháng CTLA-4) ở bệnh nhân u ác tính, tỷ lệ đáp ứng tổng thể là 53% đã được quan sát thấy [5]. Điều này cho thấy rằng hiệu quả thậm chí có thể cao hơn khi nhắm mục tiêu nhiều điểm kiểm tra trong khi các tác dụng phụ vẫn có thể kiểm soát được. Trạm kiểm soát PD-1 cũng đang được nhắm mục tiêu kết hợp với vắc xin và các liệu pháp miễn dịch khác để tối ưu hóa phản ứng lâm sàng. Tuy nhiên, vẫn còn những câu hỏi về việc nhắm mục tiêu trạm kiểm soát PD-1. Một câu hỏi quan trọng là liên quan đến cơ chế chịu trách nhiệm cho các phản ứng chống khối u ở những bệnh nhân có khối u âm tính với PDL-1.

Việc phát hiện ra tế bào Th17 và sinh học của chúng đã nâng cao đáng kể hiểu biết của chúng ta về cơ chế bệnh sinh của nhiều bệnh viêm nhiễm ở người, do đó mở ra một cơ hội mới cho sự phát triển của thế hệ tiếp theo của liệu pháp điều trị chống viêm. Sự tham gia của các tế bào Th17 và các cytokine IL-17A / F, IL-21 và IL-22 của chúng trong chứng viêm trở nên rõ ràng từ các nghiên cứu chứng minh sự hiện diện của một lượng lớn các tế bào này và các cytokine liên quan trong mô bệnh cũng như sự hiện diện của cao mức IL-17 trong huyết thanh của bệnh nhân mắc bệnh tự miễn so với người không mắc bệnh. Hơn nữa, các kháng thể với IL-17 có thể làm giảm bớt các dấu hiệu của bệnh ở một số mô hình động vật [6,7]. Kể từ những nghiên cứu ban đầu này, một số kháng thể nhắm mục tiêu IL-17A (AIN457, LY2439821), IL-17F, IL-17R và IL-23, đã đi vào thử nghiệm lâm sàng và cho đến nay đã cho thấy hiệu quả rõ rệt trong bệnh viêm khớp và bệnh vẩy nến [8- 10]. Tuy nhiên, đáng ngạc nhiên là việc nhắm mục tiêu IL-17 với các kháng thể đã cho thấy các kết quả khác nhau trong các mô hình động vật bị bệnh viêm ruột (IBD). Hơn nữa, kết quả từ các thử nghiệm lâm sàng của brodalumab (anti IL-17R) và secukinumab (anti IL-17A) trong bệnh Crohn không cải thiện được các triệu chứng bệnh, và thậm chí làm trầm trọng thêm bệnh ở một số bệnh nhân [11] cho thấy vai trò của tế bào Th17 và IL -17A dường như phức tạp hơn suy nghĩ ban đầu.

Việc phát hiện ra thụ thể hormone hạt nhân, RORγt, là cơ quan điều hòa chính của quá trình biệt hóa tế bào Th17 và tiết IL-17 cho thấy mục tiêu điều trị đối với các phân tử nhỏ chống lại trục IL-23 / IL-17. Không giống như các kháng thể nhắm vào các cytokine cụ thể, các chất đối kháng RORγt có thể làm giảm phổ đầy đủ của các cytokine liên quan đến Th17. Hơn nữa, các chất đối kháng của RORγt có nhiều khả năng làm giảm các cytokine liên quan đến Th17 hơn là ngăn chặn các cytokine này như đặc trưng của các kháng thể. Điều này sẽ cho phép một số mức độ hoạt động của IL-17 dường như cần thiết trong ruột để bảo vệ chống lại nhiễm nấm. Vì những lý do này, thuốc đối kháng RORγt có thể có hiệu quả khi liệu pháp kháng thể thất bại. Tiết lộ này đã dẫn đến một cuộc đua cạnh tranh cao giữa các công ty dược phẩm lớn và các công ty dược phẩm mới thành lập để phát triển các chất đối kháng phân tử nhỏ của RORγt. Cho đến nay, có rất nhiều chất đối kháng RORγt đang trong giai đoạn phát triển tiền lâm sàng và một loại do Orphagen và Japan Tobacco Inc. phát triển gần đây đã được đưa vào thử nghiệm lâm sàng. Các hợp chất này không chỉ cho thấy hoạt động ức chế chống lại sự biệt hóa tế bào Th17 và sản xuất IL-17, mà còn chứng minh mức độ hiệu quả khác nhau trong các mô hình bệnh vẩy nến và viêm não tự miễn thực nghiệm [12,13]. Các phân tử nhỏ tổng hợp dường như không phải là nguồn duy nhất của các chất đối kháng RORγt. Điều thú vị là thiên nhiên cũng đã tạo ra các phân tử có hiệu quả đối kháng với RORγt. Gần đây, sản phẩm tự nhiên, axit ursolic (UA), đã được phát hiện có tác dụng ức chế chọn lọc và hiệu quả chức năng của RORγt, dẫn đến giảm đáng kể biểu hiện IL-17 ở cả tế bào Th17 đang phát triển và biệt hóa [14]. Hơn nữa, điều trị viêm não tủy tự miễn thực nghiệm được cải thiện UA do đó cho thấy UA có thể là một ứng cử viên thuốc hoặc hợp chất dẫn đầu có giá trị để phát triển các phương pháp điều trị cho các bệnh viêm và ung thư qua trung gian Th17. Dựa trên những phát hiện này, rất gần đây, Đại học California Davis phối hợp với Visionary Pharmaceuticals đã bắt đầu thử nghiệm lâm sàng UA để điều trị viêm đường mật xơ cứng nguyên phát. Các kết quả của thử nghiệm này đang được mong đợi giống như kết quả từ các thử nghiệm sắp tới về chất đối kháng RORγt tổng hợp trong giai đoạn phát triển tiền lâm sàng. Đại học California Davis phối hợp với Visionary Pharmaceuticals đã bắt đầu thử nghiệm lâm sàng UA để điều trị viêm đường mật xơ cứng nguyên phát. Các kết quả của thử nghiệm này đang được mong đợi giống như kết quả từ các thử nghiệm sắp tới về chất đối kháng RORγt tổng hợp trong giai đoạn phát triển tiền lâm sàng. Đại học California Davis phối hợp với Visionary Pharmaceuticals đã bắt đầu thử nghiệm lâm sàng UA để điều trị viêm đường mật xơ cứng nguyên phát. Các kết quả của thử nghiệm này đang được mong đợi giống như kết quả từ các thử nghiệm sắp tới về chất đối kháng RORγt tổng hợp trong giai đoạn phát triển tiền lâm sàng.

Biên giới thứ ba của những tiến bộ quan trọng gần đây bao gồm những phát triển quan trọng trong dược lý cannabinoid kể từ khi phát hiện ra các thụ thể cannabinoid, CB1 và CB2. Những phát triển này bao gồm các hoạt động của cannabinoids và các đối tác nội sinh của chúng, các endocannabinoids về điều hòa miễn dịch. Các cannabinoids ngoại sinh đã được chứng minh là ngăn chặn các phản ứng miễn dịch qua trung gian tế bào T chủ yếu bằng cách gây ra quá trình apoptosis và ức chế các cytokine và chemokine gây viêm trong khi tăng các cytokine chống viêm. Ví dụ, cannabinoid tự nhiên, 9-Tetrahydrocannabinol (THC), được tìm thấy để gây ra quá trình chết rụng ở các tế bào lách ngây thơ và được kích hoạt bởi mitogen trong ống nghiệm và những tác dụng do THC gây ra này có thể bị ức chế bởi các chất đối kháng CB2 [15]. Trong nghiên cứu con người, Các đại thực bào phế nang phổi bị loại bỏ khỏi những người hút cần sa bị ảnh hưởng đến khả năng sản xuất TNF, yếu tố kích thích tế bào hạt / đại thực bào và IL-6 để đáp ứng với kích thích LPS [16]. Các nghiên cứu in vitro khác gần đây cũng cho thấy tác dụng chống viêm mạnh mẽ của cannabinoids tổng hợp CP55,940 và WIN55,212-2. Cả CP55, 940 và WIN55, 212-2 đều giảm sản xuất cytokine IL-6 và IL-8 được điều chỉnh từ các tế bào hoạt dịch giống nguyên bào sợi thấp được kích thích bởi IL-1β, thông qua cơ chế trung gian không phải CB1 / CB2 [17]. Hơn nữa, một số loại này và các loại cannabinoid tổng hợp khác đã cho thấy hiệu quả trên nhiều loại mô hình động vật [18]. Ví dụ, trong một nghiên cứu, ứng dụng ACEA trong phúc mạc, một chất chủ vận chọn lọc CB1, và JWH-133, một chất chủ vận chọn lọc CB2, dầu ức chế viêm đại tràng do mù tạt và các triệu chứng sau đó như tăng trọng lượng ruột kết xa, co thắt ruột kết, tổn thương viêm, tiêu chảy và tổn thương mô học [19]. Kết quả từ những nghiên cứu này và các nghiên cứu tương tự đã thúc đẩy việc bắt đầu các thử nghiệm lâm sàng để điều trị các bệnh viêm nhiễm. Một thử nghiệm thí điểm về cần sa giàu THC dưới dạng thuốc lá trong 8 tuần đã chứng minh những lợi ích lâm sàng đáng kể so với giả dược ở những bệnh nhân bị bệnh Crohn không đáp ứng với liệu pháp điều trị bằng steroid, chất điều hòa miễn dịch hoặc các tác nhân chống hoại tử khối u [20 ]. Hiện tại, một số cannabinoid tổng hợp đang được phát triển lâm sàng bao gồm Resumab Kết quả từ những nghiên cứu này và các nghiên cứu tương tự đã thúc đẩy việc bắt đầu các thử nghiệm lâm sàng để điều trị các bệnh viêm nhiễm. Một thử nghiệm thí điểm về cần sa giàu THC dưới dạng thuốc lá trong 8 tuần đã chứng minh những lợi ích lâm sàng đáng kể so với giả dược ở những bệnh nhân bị bệnh Crohn không đáp ứng với liệu pháp điều trị bằng steroid, chất điều hòa miễn dịch hoặc các tác nhân chống hoại tử khối u [20 ]. Hiện tại, một số cannabinoid tổng hợp đang được phát triển lâm sàng bao gồm Resumab Kết quả từ những nghiên cứu này và các nghiên cứu tương tự đã thúc đẩy việc bắt đầu các thử nghiệm lâm sàng để điều trị các bệnh viêm nhiễm. Một thử nghiệm thí điểm về cần sa giàu THC dưới dạng thuốc lá trong 8 tuần đã chứng minh những lợi ích lâm sàng đáng kể so với giả dược ở những bệnh nhân bị bệnh Crohn không đáp ứng với liệu pháp điều trị bằng steroid, chất điều hòa miễn dịch hoặc các tác nhân chống hoại tử khối u [20 ]. Hiện tại, một số cannabinoid tổng hợp đang được phát triển lâm sàng bao gồm ResumabTM bởi Corbus Pharmaceuticals cho các bệnh viêm hiếm gặp.

Rõ ràng là từ cả nghiên cứu in vitro và in vivo rằng cannabinoids có tác dụng chống viêm mạnh, phụ thuộc và độc lập với CB1 và CB2. Mặc dù người ta đã biết nhiều về tác dụng của cannabinoids đối với tế bào Th1 và chức năng của chúng, nhưng có rất ít hoặc không có thông tin về tác động của cannabinoids đối với tế bào NK, cũng như tế bào Th17 và Treg, sự cân bằng của chúng, là yếu tố quyết định nghiêm trọng đến tình trạng viêm.

Người giới thiệu

  1. Dong H, Strome SE, Salomao DR, Tamura H, Hirano F, Flies DB, et al. B7-H1 liên quan đến khối u thúc đẩy quá trình tự chết của tế bào T: một cơ chế trốn tránh miễn dịch tiềm năng. Nat Med. Năm 2002; 8: 793-800.
  2. Blank C, Kuball J, Voelkl S, Wiendl H, Becker B, Walter B, et al. Phong tỏa PD-L1 (B7-H1) làm tăng phản ứng của tế bào T đặc hiệu với khối u ở người trong ống nghiệm. Int J Cancer. Năm 2006; 119: 317-327.
  3. Rozali EN, Hato SV, Robinson BW, Lake RA, Lesterhuis WJ. Lập trình phối tử tử 2 trong ức chế miễn dịch do ung thư. Clin Dev Immunol. 2012.
  4. Topalian SL, Hodi FS, Brahmer JR, Gettinger SN, Smith DC, McDermott DF, et al. Tương quan an toàn, hoạt động và miễn dịch của kháng thể chống PD-1 trong bệnh ung thư. N Engl J Med. 2012; 366: 2443-2454.
  5. Srivastava N, McDermott D. Cập nhật về lợi ích của liệu pháp miễn dịch và liệu pháp nhắm mục tiêu trong u ác tính: bối cảnh đang thay đổi. Ung thư Manag Res. 2014; 6: 279-289.
  6. Miossec P, Kolls JK. Nhắm mục tiêu tế bào IL-17 và TH17 trong tình trạng viêm mãn tính. Nat Rev Ma túy Discov. 2012; 11: 763-776.
  7. Fitzpatrick LR. Ức chế IL-17 như một phương pháp tiếp cận dược lý đối với IBD. Int Rev Immunol. Năm 2013; 32: 544-555.
  8. Hueber W, Patel DD, Dryja T, Wright AM, Koroleva I, Bruin G, et al. Tác dụng của AIN457, một kháng thể hoàn toàn của con người đối với interleukin-17A, đối với bệnh vẩy nến, viêm khớp dạng thấp và viêm màng bồ đào. Khoa học dịch thuật Med. Năm 2010; 2: 52-72.
  9. Genovese MC, Van den Bosch F, Roberson SA, Bojin S, Biagini IM, Ryan P, et al. LY2439821, một kháng thể đơn dòng kháng interleukin-17 được nhân bản hóa, trong điều trị bệnh nhân viêm khớp dạng thấp: Một nghiên cứu ngẫu nhiên, mù đôi, có đối chứng với giả dược, giai đoạn I. Viêm khớp Thấp khớp. Năm 2010; 62: 929-939.
  10. Papp KA, Leonardi C, Cố vấn A, Ortonne JP, Krueger JG, Kricorian G, et al. Brodalumab, một kháng thể chống thụ thể interleukin-17 cho bệnh vẩy nến. N Engl J Med. 2012; 366: 1181-1189.
  11. Hueber W, Sands BE, Lewitzky S, Vandemeulebroecke M, Reinisch W, Higgins PDR, et al. Secukinumab, một kháng thể đơn dòng kháng IL-17A ở người, cho bệnh Crohn từ trung bình đến nặng: kết quả bất ngờ của một thử nghiệm ngẫu nhiên, mù đôi có đối chứng với giả dược. Ruột. 2012; 61: 1693–700.
  12. Chang MR, Lyda B, Kamenecka TM, Griffin PR. Dược lý ức chế thụ thể hạt nhân mồ côi liên quan đến thụ thể axit retinoic? Là phương pháp điều trị trong mô hình thử nghiệm viêm khớp do collagen. Viêm khớp Rheumatol Hoboken NJ. 2014; 66: 579–588.
  13. Skepner J, Ramesh R, Trocha M, Schmidt D, Baloglu E, Lobera M, et al. Sự ức chế dược lý đối với RORt điều chỉnh sự biểu hiện gen chữ ký Th17 và ngăn chặn tình trạng viêm da in vivo. J Immunol. 2014; 192: 2564-2575.
  14. Xu T, Wang X, Zhong B, Nurieva RI, Ding S, Dong C. Axit ursolic ngăn chặn interleukin-17 (T1, Wang X, Zhong B, Nurieva RI, Ding S, Đông C. Axit ursolic ngăn chặn interleukin-17 (IL -17) sản xuất bằng cách đối kháng chọn lọc chức năng của protein RORgamma t. J Biol Chem. 2011; 286: 22707-22710.
  15. McKallip RJ, Lombard C, Martin BR, Nagarkatti M, Nagarkatti PS. Quá trình apoptosis do Delta (9) -tetrahydrocannabinol gây ra ở tuyến ức và lá lách như một cơ chế ức chế miễn dịch in vitro và in vivo. J Pharmacol Exp Ther. Năm 2002; 302: 451-465.
  16. Baldwin GC, Tashkin DP, Buckley DM, Park AN, Dubinett SM, Roth MD. Cần sa và cocaine làm suy giảm chức năng của đại thực bào phế nang và sản xuất cytokine. Am J Respir Crit Care Med. Năm 1997; 156: 1606-1613.
  17. Selvi E, Lorenzini S, Garcia Gonzalez E, Maggio R, Lazzerini PE, Capecchi PL, et al. Tác dụng ức chế của cannabinoids tổng hợp trên sản xuất cytokine trong các tế bào hoạt dịch giống nguyên bào sợi dạng thấp. Clin Exp Rheumatol. Năm 2008; 26: 574-581.
  18. Nagarkatti P, Pandey R, Rieder SA, Hegde VL, Nagarkatti M. Cannabinoids làm thuốc chống viêm mới. Med Chem trong tương lai. Năm 2009; 1: 1333-1349.
  19. Kimball ES, Schneider CR, Wallace NH, Hornby PJ. Thuốc đồng vận của thụ thể cannabinoid 1 và 2 ức chế chứng viêm đại tràng thực nghiệm do dầu mù tạt và dextran sulfat natri gây ra. Am J Physiol Thuốc tiêu hóa gan Physiol. Năm 2006; 291: 364–371.
  20. Naftali T, Bar-Lev Schleider L, Dotan I, Lansky EP, Sklerovsky Benjaminov F, Konikoff FM, et al. Cần sa gây ra phản ứng lâm sàng ở bệnh nhân mắc bệnh Crohn: một nghiên cứu tiền cứu có đối chứng với giả dược. Clin Gastroenterol Hepatol Tắt Clin Pract J Am Gastroenterol PGS.TS. Năm 2013; 11: 1276–1280.

 

 

Nghiên cứu giai đoạn 2 về Anti-PD-1 độc lập hoặc kết hợp với Anti-CTLA-4 trong ung thư cổ tử cung cấp hai

Liệu pháp điều trị ung thư bằng cách ức chế điều hòa miễn dịch tiêu cực bằng việc phong tỏa CTLA-4 và PD-1 7 Tính an toàn và hiệu lực khoa học của nghiên cứu này là trách nhiệm của nhà tài trợ nghiên cứu và các nhà điều tra. Liệt kê một nghiên cứu không có nghĩa là nó đã được Chính phủ Liên bang Hoa Kỳ đánh giá. Biết rủi ro và lợi ích tiềm năng của các nghiên cứu lâm sàng và nói chuyện với nhà cung cấp dịch vụ chăm sóc sức khỏe của bạn trước khi tham gia. Đọc tuyên bố từ chối trách nhiệm của chúng tôi để biết chi tiết.
ClinicalTrials.gov Định danh: NCT03894215

Tình trạng tuyển dụng  : Tuyển dụng

Đăng lần đầu  : 28 tháng 3, 2019
Cập nhật lần cuối đã đăng  : Ngày 26 tháng 8 năm 2020
Xem Danh bạ và Vị trí
Nhà tài trợ:
Agenus Inc.
Cộng tác viên:
Nhóm ung thư phụ khoa
Thông tin do (Bên chịu trách nhiệm) cung cấp:
Agenus Inc.
  • Chi tiết nghiên cứu
  • Chế độ xem dạng bảng
  • Không có kết quả nào được đăng
  • Khước từ
  • Cách đọc Hồ sơ Nghiên cứu
Mô tả nghiên cứu
Đi đến 
Bản tóm tắt ngắn gọn:
Đây là một thử nghiệm lâm sàng giai đoạn 2 ngẫu nhiên, mù, không so sánh, hai nhánh để đánh giá hiệu quả và độ an toàn của AGEN2034 được sử dụng với giả dược (Nhóm điều trị 1 – đơn trị liệu) hoặc với AGEN1884 (Nhóm điều trị 2 – liệu pháp kết hợp) để điều trị bệnh nhân bị ung thư cổ tử cung giai đoạn cuối tái phát hoặc tiến triển sau khi được hóa trị liệu đầu tiên dựa trên bạch kim. Nghiên cứu không nhằm so sánh hiệu quả của 2 nhánh thí nghiệm. Thay vào đó, hiệu quả của từng nhánh sẽ được đánh giá dựa trên các biện pháp kiểm soát lịch sử liên quan của nó khi thích hợp.
Tình trạng hoặc bệnh tật Can thiệp / điều trị Giai đoạn
Ung thư cổ tử cung Thuốc: AGEN2034Thuốc: AGEN1884 Giai đoạn 2
Miêu tả cụ thể:

Đây là một thử nghiệm lâm sàng giai đoạn 2 ngẫu nhiên, mù, không so sánh, hai nhánh để đánh giá hiệu quả và độ an toàn của AGEN2034 được sử dụng với giả dược (Nhóm điều trị 1 – đơn trị liệu) hoặc với AGEN1884 (Nhóm điều trị 2 – liệu pháp kết hợp) để điều trị bệnh nhân bị ung thư cổ tử cung giai đoạn cuối tái phát hoặc tiến triển sau khi được hóa trị liệu đầu tiên dựa trên bạch kim. Nghiên cứu không nhằm so sánh hiệu quả của 2 nhánh thí nghiệm. Thay vào đó, hiệu quả của mỗi nhánh sẽ được đánh giá dựa trên các kiểm soát tiền sử liên quan của nó khi thích hợp Bệnh nhân sẽ nhận được AGEN2034 với giả dược dưới dạng đơn trị liệu hoặc với AGEN1884 dưới dạng liệu pháp kết hợp trong tối đa 24 tháng hoặc cho đến khi tiến triển được xác nhận, độc tính không thể chấp nhận được hoặc bất kỳ tiêu chí nào cho ngừng thuốc nghiên cứu hoặc rút khỏi thử nghiệm xảy ra. Việc sử dụng giả dược trong Nhóm điều trị 1 (đơn trị liệu AGEN 2034) của nghiên cứu nhằm duy trì tính toàn vẹn trong cách giải thích của các nhà điều tra về dữ liệu hiệu quả và an toàn bằng cách loại bỏ các thành kiến trong việc theo dõi đánh giá bệnh, tuyên bố tiến triển của bệnh và đánh giá độc tính. Do đó, điều tra viên, bệnh nhân và nhân viên nghiên cứu sẽ không biết liệu bệnh nhân đã dùng AGEN2034 / giả dược (Nhóm điều trị 1) hay AGEN2034 / AGEN1884 (Nhóm điều trị 2).

Ủy ban Giám sát Dữ liệu Độc lập (IDMC) sẽ đánh giá tính an toàn và hiệu quả. IRRC sẽ được thành lập để xem xét phản ứng của khối u ..

Thiết kế nghiên cứu
Đi đến 
kiểu học  : Can thiệp (Thử nghiệm lâm sàng)
Ghi danh ước tính : 200 người tham gia
Phân bổ: Ngẫu nhiên
Mô hình can thiệp: Chuyển nhượng song song
Mặt nạ: Bốn người (Người tham gia, Người cung cấp dịch vụ chăm sóc, Người điều tra, Người đánh giá kết quả)
Mục đích chính: Sự đối xử
Tiêu đề chính thức: Một thử nghiệm hai nhánh, ngẫu nhiên, không so sánh, giai đoạn 2 của AGEN2034 (Anti-PD-1) như một liệu pháp đơn trị hoặc liệu pháp kết hợp với AGEN1884 (Anti-CTLA4) hoặc với giả dược ở phụ nữ bị ung thư cổ tử cung tái phát (Dòng thứ hai) – RaPiDS
Ngày bắt đầu nghiên cứu thực tế : 1 tháng 6, 2019
Ngày hoàn thành chính ước tính : Tháng 9 năm 2023
Ngày hoàn thành nghiên cứu ước tính : Tháng 9 năm 2023

Liên kết tài nguyên do Thư viện Y khoa Quốc gia cung cấpLiệu pháp điều trị ung thư bằng cách ức chế điều hòa miễn dịch tiêu cực bằng việc phong tỏa CTLA-4 và PD-1 8

Chủ đề liên quan đến MedlinePlus : Ung thư Cổ tử cung
Tài nguyên FDA Hoa Kỳ
Vũ khí và Can thiệp
Đi đến 
Cánh tay Can thiệp / điều trị
Thử nghiệm: AGEN2034 + Giả dược

AGEN2034 dùng với giả dược đơn trị liệu: khoảng 100 bệnh nhân.
Thuốc: AGEN2034

Kháng thể PD-1
Thử nghiệm: AGEN2034 + AGEN1884

AGEN2034 dùng kết hợp với AGEN1884 (liệu pháp phối hợp): khoảng 100 bệnh nhân.
Thuốc: AGEN2034

Kháng thể PD-1

Thuốc: AGEN1884

Kháng thể CTLA-4
Các biện pháp kết quả
Đi đến 

Các biện pháp kết quả chính  :

  1. Tỷ lệ phản hồi khách quan [Khung thời gian: 48 tháng]
    Để đánh giá Tỷ lệ đáp ứng mục tiêu (ORR) đối với việc điều trị AGEN2034 (chống PD-1) được sử dụng với giả dược (Nhóm điều trị 1 – đơn trị liệu), hoặc với AGEN1884 (chống CTLA4) (Nhóm điều trị 2 – liệu pháp kết hợp), được xác định là tỷ lệ hai ý định điều trị (ITT) bệnh nhân có đáp ứng tổng thể tốt nhất (BOR) đáp ứng hoàn toàn (CR) hoặc đáp ứng một phần (PR), ở những phụ nữ bị ung thư cổ tử cung tái phát / dai dẳng / di căn tiến triển sau liệu pháp đầu tay . BOR sẽ được xác định bởi Ủy ban Đánh giá X quang Độc lập (IRRC), theo Tiêu chí Đánh giá Đáp ứng trong Khối u Rắn phiên bản 1.1 (RECIST 1.1).

Các biện pháp kết quả thứ cấp  :

  1. Tần suất, mức độ nghiêm trọng và thời gian của các AE mới điều trị [Khung thời gian: 48 tháng]
    Để xác nhận tính an toàn và khả năng dung nạp của AGEN2034 được dùng với giả dược (Nhóm điều trị 1 – đơn trị liệu) hoặc với AGEN1884 (Nhóm điều trị 2 – liệu pháp kết hợp) ở bệnh nhân ung thư cổ tử cung cấp hai tái phát, tiến triển.
  2. DOR trên mỗi RECIST 1.1 [Khung thời gian: 48 tháng]
    Để đánh giá thời gian đáp ứng (DOR), bệnh ổn định (SD), thời gian bệnh ổn định và tỷ lệ kiểm soát bệnh (DCR), thời gian sống thêm toàn bộ (OS) và thời gian sống không tiến triển (PFS) trên mỗi RECIST 1.1 đối với AGEN2034 được sử dụng với giả dược ( Cánh điều trị 1 – đơn trị liệu) hoặc với AGEN1884 (Cánh điều trị 2 – liệu pháp kết hợp).
  3. Thời gian để xác nhận tiến trình [Khung thời gian: 48 tháng]
    Để ước tính thời gian tiến triển được xác nhận bởi điều tra viên theo iRECIST đối với AGEN2034 được sử dụng với giả dược (Nhóm điều trị 1 – đơn trị liệu) hoặc với AGEN1884 (Nhóm điều trị 2 – liệu pháp kết hợp).
  4. Khả năng sinh miễn dịch của AGEN2034 [Khung thời gian: 48 tháng]
    Để đánh giá khả năng sinh miễn dịch của AGEN2034 được sử dụng với giả dược (Nhóm điều trị 1 – đơn trị liệu) hoặc với AGEN1884 (Nhóm điều trị 2 – liệu pháp kết hợp) và để tương quan với sự tiếp xúc và hoạt động sinh học.
  5. Nồng độ thuốc tối đa quan sát được ở trạng thái ổn định (Cmax-ss) [Khung thời gian: 48 tháng]
    Để mô tả dược động học AGEN2034 và AGEN1884 (PK).
  6. Nồng độ thuốc tối thiểu quan sát được ở trạng thái ổn định (Cmin-ss) [Khung thời gian: 48 tháng]
    Để mô tả dược động học AGEN2034 và AGEN1884 (PK).
  7. Diện tích dưới đường cong nồng độ-thời gian trong khoảng thời gian t1 đến t2 ở trạng thái ổn định (AUC (τ1-τ2) -ss) [Khung thời gian: 48 tháng]
    Để mô tả dược động học AGEN2034 và AGEN1884 (PK).
  8. Diện tích dưới đường cong nồng độ thuốc theo thời gian từ thời điểm 0 đến thời điểm t (AUC (0-t)) [Khung thời gian: 48 tháng]
    Để mô tả dược động học AGEN2034 và AGEN1884 (PK).
  9. Diện tích dưới đường cong nồng độ thuốc theo thời gian từ 0 đến vô cùng (AUC (0-∞)) [Khung thời gian: 48 tháng]
    Để mô tả dược động học AGEN2034 và AGEN1884 (PK).
  10. Thời gian đến nồng độ thuốc tối đa (tmax) [Khung thời gian: 48 tháng]
    Để mô tả dược động học AGEN2034 và AGEN1884 (PK).
  11. Hằng số tốc độ xử lý đầu cuối (λz) [Khung thời gian: 48 tháng]
    Để mô tả dược động học AGEN2034 và AGEN1884 (PK).
  12. Chu kỳ bán hủy đầu cuối (t1 / 2) [Khung thời gian: 48 tháng]
    Để mô tả dược động học AGEN2034 và AGEN1884 (PK).
  13. Thanh thải toàn thân (CL) [Khung thời gian: 48 tháng]
    Để mô tả dược động học AGEN2034 và AGEN1884 (PK).
  14. Khối lượng phân phối (Vd) [Khung thời gian: 48 tháng]
    Để mô tả dược động học AGEN2034 và AGEN1884 (PK).
  15. Đánh giá chất lượng cuộc sống trên FACT-Cx [Khung thời gian: 35 tháng]
    Để đánh giá chất lượng cuộc sống trong quần thể được điều trị bằng cách sử dụng Đánh giá Chức năng của Liệu pháp Ung thư – Chỉ số Kết quả Thử nghiệm Ung thư Cổ tử cung (FACT-Cx)
  16. Đánh giá chất lượng cuộc sống trên mỗi BPI [Khung thời gian: 35 tháng]
    Để đánh giá chất lượng cuộc sống trong nhóm dân số được điều trị bằng cách sử dụng Kiểm kê Đau ngắn (BPI)
Đủ tiêu chuẩn
Đi đến 

Thông tin từ Thư viện Y khoa Quốc giaLiệu pháp điều trị ung thư bằng cách ức chế điều hòa miễn dịch tiêu cực bằng việc phong tỏa CTLA-4 và PD-1 8Lựa chọn tham gia vào một nghiên cứu là một quyết định cá nhân quan trọng. Nói chuyện với bác sĩ và các thành viên gia đình hoặc bạn bè của bạn về quyết định tham gia một nghiên cứu. Để tìm hiểu thêm về nghiên cứu này, bạn hoặc bác sĩ của bạn có thể liên hệ với nhân viên nghiên cứu của nghiên cứu bằng các liên hệ được cung cấp bên dưới. Để biết thông tin chung, Tìm hiểu về Nghiên cứu Lâm sàng.

Tuổi Đủ điều kiện để Nghiên cứu: 18 tuổi trở lên (Người lớn, Người lớn tuổi)
Giới tính Đủ điều kiện cho Nghiên cứu: Giống cái
Tính đủ điều kiện dựa trên giới tính: Đúng
Giới tính Đủ điều kiện Mô tả: Chỉ nữ
Chấp nhận tình nguyện viên lành mạnh: Không
Tiêu chí

Tiêu chí lựa chọn:

  1. Tự nguyện đồng ý tham gia bằng cách đưa ra sự đồng ý bằng văn bản. (Việc tham gia thử nghiệm dược lý học là tùy chọn)
  2. ≥18 tuổi
  3. Chẩn đoán:
    1. Có (1) chẩn đoán xác định về mặt mô học hoặc tế bào học của ung thư biểu mô tế bào vảy, ung thư biểu mô tuyến, hoặc ung thư biểu mô tuyến của cổ tử cung, và (2) bệnh di căn, tiến triển tại chỗ và / hoặc không thể cắt bỏ tại thời điểm nhập học. Cần xác nhận mô học của khối u nguyên phát ban đầu thông qua báo cáo bệnh lý.Lưu ý: Các khối u cổ tử cung sau đây không đủ điều kiện: độ lệch tối thiểu / u tuyến ác tính, ung thư biểu mô tuyến loại dạ dày, ung thư biểu mô tế bào rõ và ung thư biểu mô trung bì.
    2. Bị ung thư cổ tử cung và đã tái phát sau một phác đồ điều trị dựa trên bạch kim (dòng đầu tiên) cho bệnh tiến triển (tái phát, không thể chữa khỏi hoặc di căn);

    Lưu ý: Bệnh nhân được hóa trị đồng thời với xạ trị chính (ví dụ: cisplatin hàng tuần) hoặc bệnh nhân nhận hóa trị bổ trợ sau khi hoàn thành xạ trị (ví dụ: paclitaxel và carboplatin trong ≤ 4 chu kỳ) và tiến triển trong vòng 6 tháng sau khi hoàn thành điều trị sẽ đủ điều kiện là hệ thống này liệu pháp sẽ được coi là điều trị đầu tay.

  4. Bệnh có thể đo lườnga) Có bệnh có thể đo được trên hình ảnh dựa trên RECIST phiên bản 1.1 do điều tra viên đánh giá.Lưu ý: Bệnh nhân phải có ít nhất một “tổn thương đích” được sử dụng để đánh giá đáp ứng, theo định nghĩa của RECIST phiên bản 1.1. Các khối u trong vùng đã chiếu xạ trước đó sẽ được chỉ định là tổn thương “không đích” trừ khi tiến triển được ghi nhận, hoặc sinh thiết được lấy để xác nhận sự tồn tại ít nhất 90 ngày sau khi hoàn thành xạ trị.
  5. Có tuổi thọ ít nhất 3 tháng và trạng thái hoạt động của Nhóm Ung thư Hợp tác Miền Đông (ECOG) là 0 hoặc 1.
  6. Có đầy đủ chức năng cơ quan như được chỉ ra bởi các giá trị phòng thí nghiệm sau:
    1. Chức năng huyết học đầy đủ được xác định bằng số lượng bạch cầu trung tính tuyệt đối (ANC)> 1,5 x 10 ^ 9 / L, số lượng tiểu cầu> 100 x 10 ^ 9 / L và hemoglobin> 8 g / dL (không cần truyền máu trong vòng 1 tuần kể từ liều đầu tiên).
    2. Chức năng gan đầy đủ dựa trên mức bilirubin toàn phần ≤ 1,5 giới hạn trên của cơ quan bình thường (IULN), mức aspartate aminotransferase (AST) ≤ 2,5 x IULN, mức alanin aminotransferase (ALT) ≤ 2,5 x IULN và phosphatase kiềm ≤ 2,5 IULN và albumin ≥3,0 mg / dL.
    3. Chức năng thận đầy đủ được xác định khi độ thanh thải creatinin tính toán> 50 mL / phút (độ thanh thải creatinin nên được tính bằng phương pháp Cockcroft-Gault).
    4. Đông máu đầy đủ được xác định bằng tỷ lệ chuẩn hóa quốc tế (INR) hoặc thời gian prothrombin ≤ 1,5 x IULN (trừ khi bệnh nhân đang điều trị chống đông máu); và thời gian thromboplastin từng phần được kích hoạt (aPTT) ≤ 1,5 x IULN (trừ khi bệnh nhân đang được điều trị chống đông máu)
  7. Không có tiền sử bệnh ác tính trước đó, ngoại trừ ung thư biểu mô tế bào đáy của da, ung thư bàng quang bề ngoài, ung thư biểu mô tế bào vảy của da và đã trải qua liệu pháp điều trị có khả năng chữa khỏi mà không có bằng chứng về bệnh tái phát trong 5 năm kể từ khi bắt đầu liệu pháp.
  8. Bệnh nhân phải cung cấp mẫu mô khối u nhúng parafin cố định bằng formalin (FFPE) đầy đủ và thích hợp, tốt nhất là từ mẫu sinh thiết gần đây nhất của tổn thương khối u, được thu thập tại thời điểm hoặc sau khi chẩn đoán bệnh tiến triển hoặc di căn đã được thực hiện VÀ từ một trang web chưa được chiếu xạ trước đó. Nếu không có mô khối u, sinh thiết tươi sẽ được yêu cầuLưu ý: Cần phải lấy mô từ kim hoặc sinh thiết cắt bỏ.
  9. Bệnh nhân phải có kết quả thử thai huyết thanh âm tính khi sàng lọc (trong vòng 72 giờ kể từ khi dùng liều thuốc nghiên cứu đầu tiên) nếu có khả năng sinh con hoặc không có khả năng sinh con. Khả năng không sinh đẻ được định nghĩa là (không phải vì lý do y tế):
    1. ≥45 tuổi và không có kinh trong hơn 1 năm,
    2. Suy nhược ≥ 2 năm mà không cắt tử cung và cắt buồng trứng và giá trị hormone kích thích nang trứng (FSH) trong phạm vi sau mãn kinh khi đánh giá trước khi xét nghiệm (sàng lọc),
    3. Tiền sử cắt tử cung, cắt vòi trứng hoặc thắt ống dẫn trứng.
    4. Xạ trị vùng chậu chắc chắn để điều trị ung thư cổ tử cung.
  10. Nếu có khả năng sinh con, bệnh nhân nữ phải sẵn sàng sử dụng 2 phương pháp rào cản thích hợp trong suốt quá trình nghiên cứu, bắt đầu từ lần khám sàng lọc trong 120 ngày sau liều điều trị cuối cùng.Lưu ý: Có thể chấp nhận kiêng nếu đây là biện pháp tránh thai đã được thiết lập và ưu tiên cho bệnh nhân.
  11. Sẵn sàng và có thể tuân thủ các yêu cầu của giao thức.

Tiêu chí Loại trừ:

Bệnh nhân phải bị loại khỏi việc tham gia thử nghiệm nếu bệnh nhân:

  1. Hiện đang tham gia và nhận liệu pháp nghiên cứu hoặc đã tham gia vào một nghiên cứu về tác nhân điều tra và được điều trị nghiên cứu hoặc sử dụng thiết bị điều tra trong vòng 4 tuần kể từ liều điều trị đầu tiên.
  2. Có thời gian rửa trôi không đủ trước khi dùng liều đầu tiên của thuốc nghiên cứu được xác định là:
    1. Đã nhận liệu pháp sinh học hoặc hóa trị độc tế bào toàn thân trong vòng 3 tuần trước liều đầu tiên,
    2. Được xạ trị trong vòng 3 tuần trước liều đầu tiên, hoặc
    3. Đã phẫu thuật lớn trong vòng 4 tuần trước liều đầu tiên.
  3. Đã được điều trị trước với:
    1. Bất kỳ loại thuốc / kháng thể nào nhắm mục tiêu đến các protein đồng điều hòa tế bào T (điểm kiểm tra miễn dịch) như kháng thể chống PD-1, chống PD-L1 hoặc kháng thể kháng nguyên tế bào lympho T chống độc tế bào 4 (CTLA-4)
    2. Nhiều hơn 1 phác đồ điều trị toàn thân cho bệnh ung thư cổ tử cung tiến triển (tái phát, không thể chữa khỏi hoặc di căn) mà bệnh nhân được xem xét để nghiên cứu.
  4. Có độc tính dai dẳng liên quan đến liệu pháp trước đây của Viện Ung thư Quốc gia Tiêu chí Thuật ngữ Chung về Sự kiện Có hại phiên bản 5.0 (NCI-CTCAE) Mức độ> 1 mức độ nghiêm trọng.Lưu ý: Có thể chấp nhận được bệnh lý thần kinh cảm giác hoặc chứng rụng tóc ở độ ≤2.
  5. Dự kiến sẽ yêu cầu bất kỳ hình thức điều trị chống ung thư toàn thân hoặc cục bộ nào khác trong khi đang thử nghiệm (bao gồm điều trị duy trì với một tác nhân khác, xạ trị và / hoặc phẫu thuật cắt bỏ).
  6. Đã biết các phản ứng quá mẫn nghiêm trọng với các kháng thể đơn dòng hoàn toàn của người (NCI-CTCAE Grade ≥3), có tiền sử sốc phản vệ hoặc hen suyễn không kiểm soát được. (Nghĩa là, ≥3 đặc điểm của hen suyễn được kiểm soát một phần).
  7. Đã được điều trị corticosteroid toàn thân ≤ 7 ngày trước liều đầu tiên của điều trị thử nghiệm hoặc nhận bất kỳ dạng thuốc ức chế miễn dịch toàn thân nào khác (sử dụng corticosteroid trong nghiên cứu để quản lý các tác dụng phụ liên quan đến miễn dịch (AE) và / hoặc điều trị trước cho thuốc cản quang qua đường tĩnh mạch) dị ứng / phản ứng được cho phép). Những bệnh nhân đang được điều trị thay thế corticosteroid hàng ngày là một ngoại lệ đối với quy tắc này. Prednisone hàng ngày với liều lên đến 5 mg hoặc liều hydrocortisone tương đương là những ví dụ về liệu pháp thay thế được phép.
  8. Có khối u ở hệ thần kinh trung ương (CNS), (các) di căn và / hoặc viêm màng não ung thư được xác định trên hình ảnh não cơ bản thu được trong giai đoạn sàng lọc HOẶC được xác định trước khi có sự đồng ý.Lưu ý: Những bệnh nhân có tiền sử di căn não đã được điều trị có thể tham gia với điều kiện họ có bằng chứng về tổn thương trên lều ổn định khi tầm soát (dựa trên 2 bộ hình ảnh não, được thực hiện cách nhau ≥ 4 tuần và thu được sau khi điều trị di căn não). Ngoài ra, bất kỳ triệu chứng thần kinh nào phát triển do di căn não hoặc do điều trị của chúng phải được giải quyết hoặc giảm thiểu và được coi là di chứng từ các tổn thương đã được điều trị. Đối với những người đã dùng steroid như một phần của điều trị di căn não, steroid phải được ngừng sử dụng ≥ 7 ngày trước khi dùng liều thuốc đầu tiên.
  9. Có tiền sử bệnh tự miễn hoạt động hoặc cần điều trị toàn thân bằng ức chế miễn dịch trong vòng 2 năm kể từ khi bắt đầu điều trị thử nghiệm (tức là có sử dụng thuốc điều chỉnh bệnh, corticosteroid hoặc thuốc ức chế miễn dịch). Liệu pháp thay thế (tức là thyroxine, insulin, hoặc liệu pháp thay thế corticosteroid sinh lý cho bệnh suy tuyến thượng thận hoặc tuyến yên, v.v.) không được coi là một hình thức điều trị toàn thân ức chế miễn dịch.Lưu ý: Những bệnh nhân mắc bệnh tiểu đường loại 1, bệnh bạch biến, bệnh vẩy nến, bệnh cường giáp hoặc bệnh cường giáp không cần điều trị ức chế miễn dịch đều đủ tiêu chuẩn.
  10. Đã được cấy ghép mô dị sinh / cơ quan rắn.
  11. Đã hoặc đang mắc bệnh phổi kẽ (ILD) HOẶC đã có tiền sử viêm phổi cần dùng corticosteroid uống hoặc tiêm tĩnh mạch.
  12. Bị nhiễm trùng hoạt động cần điều trị toàn thân qua đường tĩnh mạch (IV).
  13. Đã biết tiền sử về Virus suy giảm miễn dịch ở người (HIV) (kháng thể HIV 1/2).
  14. Đã biết bệnh Viêm gan B (HBV), Viêm gan C (HCV) hoặc bệnh lao. Viêm gan B hoạt động được định nghĩa là một kết quả HBsAg dương tính. Viêm gan C hoạt động được xác định bằng kết quả Hep C Ab dương tính đã biết và kết quả định lượng HCV ribonucleic acid (RNA) lớn hơn giới hạn phát hiện thấp hơn của xét nghiệm.
  15. Có bệnh tim mạch nghiêm trọng về mặt lâm sàng (tức là đang hoạt động): tai biến mạch máu não / đột quỵ hoặc nhồi máu cơ tim trong vòng 6 tháng sau khi nhập học, đau thắt ngực không ổn định, suy tim sung huyết (Hiệp hội Tim mạch New York loại ≥II) hoặc rối loạn nhịp tim không kiểm soát nghiêm trọng cần dùng thuốc hoặc can thiệp .
  16. Có tiền sử hoặc bằng chứng hiện tại về bất kỳ tình trạng, liệu pháp hoặc sự bất thường nào trong phòng thí nghiệm có thể ảnh hưởng đến kết quả của thử nghiệm, cản trở sự tham gia của bệnh nhân trong toàn bộ thời gian thử nghiệm hoặc không vì lợi ích tốt nhất của bệnh nhân khi tham gia, theo ý kiến của điều tra viên điều trị.
  17. Đã biết các rối loạn tâm thần hoặc lạm dụng chất kích thích có thể cản trở việc hợp tác với các yêu cầu của phiên tòa.
  18. Tại thời điểm ký sự đồng ý được thông báo, là một người sử dụng thường xuyên (bao gồm cả “sử dụng để giải trí”) của bất kỳ loại thuốc bất hợp pháp nào hoặc có tiền sử gần đây (trong năm qua) lạm dụng chất gây nghiện (bao gồm cả rượu). Việc sử dụng cần sa làm thuốc không được coi là “bất hợp pháp” và được phép sử dụng trước và trong khi ghi danh.
  19. Không có năng lực pháp luật hoặc bị hạn chế năng lực hành vi.
  20. Đang mang thai hoặc đang cho con bú hoặc mong muốn thụ thai trong thời gian dự kiến của thử nghiệm, bắt đầu với lần khám sàng lọc trong 120 ngày sau liều cuối cùng của AGEN2034 và / hoặc AGEN1884.

 

Các con đường và mạng lưới gen làm trung gian cho các tác động điều tiết của cannabidiol, một cannabinoid không hoạt tính, trong tế bào T tự miễn dịch

Ewa Kozela ,Đồng tác giả Ana Juknat , Fuying Gao , Nathali Kaushansky , Giovanni Coppola ,và Zvi Vogel
Thông tin tác giả Ghi chú bài viết Thông tin bản quyền và giấy phép Tuyên bố từ chối trách nhiệm
Bài báo này đã được trích dẫn bởi các bài báo khác trong PMC.

Dữ liệu liên kết

Tuyên bố về tính sẵn có của dữ liệu
Đi đến:

trừu tượng

Lý lịch

Các nghiên cứu trước đây của chúng tôi cho thấy rằng cannabinoid không có tác dụng thần kinh, cannabidiol (CBD), cải thiện các triệu chứng lâm sàng trong myelin chuột oligodendrocyte glycoprotein (MOG) 35-55 gây ra mô hình viêm não tự miễn thực nghiệm của bệnh đa xơ cứng (MS) cũng như giảm trí nhớ MOG35 Tăng sinh -55 tế bào T đặc hiệu (T MOG ) và tiết cytokine bao gồm IL-17, một yếu tố tự miễn dịch chính. Cơ chế của các hoạt động này hiện chưa được hiểu rõ.

Phương pháp

Trong tài liệu này, bằng cách sử dụng cấu hình biểu hiện gen dựa trên microarray, chúng tôi mô tả mạng lưới gen và các con đường nội bào liên quan đến sự ức chế do CBD gây ra đối với các tế bào T MOG bộ nhớ được kích hoạt này . Các tế bào MOG T gây não được kích thích với MOG35-55 khi có mặt các tế bào trình diện kháng nguyên có nguồn gốc từ lá lách (APC) có hoặc không có CBD. mRNA của T MOG tinh khiết sau đó được phân tích vi mô Illumina, tiếp theo là phân tích con đường khéo léo (IPA), phân tích mạng đồng biểu hiện gen có trọng số (WGCNA) và bản thể học gen (GO) để làm sáng tỏ các tương tác gen. Kết quả đã được xác nhận bằng cách sử dụng các xét nghiệm qPCR và ELISA.

Các kết quả

Hồ sơ gen cho thấy rằng phương pháp điều trị CBD ngăn chặn sự phiên mã của một số lượng lớn các gen tiền viêm trong T MOG được kích hoạt . Chúng bao gồm các cytokine ( Xcl1, Il3 , Il12a, Il1b ), thụ thể cytokine ( Cxcr1 , Ifngr1 ), các yếu tố phiên mã ( Ier3, Atf3, Nr4a3, Crem ) và các phân tử tín hiệu siêu họ TNF ( Tnfsf11 , Tnfsf14 , Tnfrsf18 , Tnfrsf18 ). “Sự khác biệt IL-17 ” và “ Tín hiệu IL-6 và IL-10 ” được xác định trong số các quá trình hàng đầu bị ảnh hưởng bởi CBD. CBD làm tăng một số bảng điểm phụ thuộc IFN (Rgs16, Mx2 , Rsad2 , Irf4 , Ifit2 , Ephx1 , Ets2 ) được biết là thực hiện các hoạt động chống tăng sinh trong tế bào T. Thật thú vị, một số bản sao được điều chỉnh theo MOG35-55 nhất định được duy trì ở mức cao khi có CBD, bao gồm các yếu tố phiên mã ( Egr2 , Egr1 , Tbx21 ), cytokine ( Csf2 , Tnf , Ifng ) và chemokine ( Ccl3 , Ccl4 , Cxcl10 ) gợi ý rằng CBD có thể thúc đẩy cạn kiệt bộ nhớ T MOGtế bào. Ngoài ra, CBD tăng cường phiên mã của các phân tử đồng ức chế tế bào T ( Btla , Lag3 , Trat1 , và CD69 ) được biết là can thiệp vào tương tác T / APC. Hơn nữa, CBD tăng cường sự phiên mã của các chất điều biến stress oxy hóa với hoạt tính chống viêm mạnh được kiểm soát bởi Nfe2l2 / Nrf2 ( Mt1 , Mt2a , Slc30a1 , Hmox1 ).

Kết luận

Hồ sơ biểu hiện gen dựa trên microarray đã chứng minh rằng CBD phát huy tác dụng điều hòa miễn dịch của nó trong các tế bào T MOG trong bộ nhớ được kích hoạt thông qua (a) ức chế phiên mã liên quan đến Th17 tiền viêm, (b) bằng cách thúc đẩy sự kiệt sức / dung nạp của tế bào T, (c) tăng cường khả năng chống phụ thuộc IFN chương trình tăng sinh, (d) cản trở sự trình bày kháng nguyên, và (d) tạo ra chất chống oxy hóa giải quyết tình trạng viêm. Những phát hiện này đưa ra cơ chế mà CBD phát huy tác dụng chống viêm cũng như giải thích vai trò có lợi của CBD trong các tế bào T bộ nhớ bệnh lý và trong các bệnh tự miễn dịch.

Tài liệu bổ sung điện tử

Phiên bản trực tuyến của bài viết này (doi: 10.1186 / s12974-016-0603-x) có chứa tài liệu bổ sung dành cho người dùng được ủy quyền.

Từ khóa: Tự miễn dịch, Tế bào T bộ nhớ, Biểu hiện gen, Cannabidiol
Đi đến:

Lý lịch

Các cannabinoid tự nhiên ( có nguồn gốc từ Cần sa ), tổng hợp và nội sinh đã được chứng minh là có tác dụng chống viêm mạnh mẽ trong các mô hình viêm khác nhau (được [ 1 , 2 ] xem xét ), bao gồm tự miễn dịch qua trung gian tế bào T. [ 3 ]. Tuy nhiên, hầu hết các thí nghiệm đều tập trung vào tác động của THC, thành phần chính của Cần sa tác động tâm thần và trên các phối tử giống THC tương tác với các thụ thể cannabinoid CB1 (chủ yếu biểu hiện trên tế bào thần kinh) hoặc thụ thể CB2 (có nhiều trên các tế bào miễn dịch). Một phytocannabinoid khác, cannabidiol (CBD) gần đây đã được quan tâm nhiều như một hợp chất điều hòa miễn dịch mạnh [ 4]. CBD có ái lực rất yếu đối với các thụ thể cannabinoid CB1 và CB2 và do đó thiếu hoạt động tâm thần qua trung gian CB1 [ 5 ]. Hơn nữa, CBD được chứng minh là có độc tính rất thấp khi kiểm tra trên người [ 6 ].

Thật vậy, CBD đã được quan sát để gây ra tác dụng chống viêm ở các mô hình động vật bị viêm khớp do collagen qua trung gian tế bào T [ 7 ], bệnh tiểu đường tự miễn [ 8 ] và viêm gan tự miễn [ 9 ]. Gần đây, chúng tôi đã báo cáo rằng CBD đã quản lý các triệu chứng lâm sàng cải thiện hệ thống ở chuột myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) 35-55 gây ra mô hình viêm não tự miễn thực nghiệm (EAE) của bệnh đa xơ cứng (MS), một bệnh tự miễn thoái hóa thần kinh dẫn đến tê liệt tiến triển và bắt đầu bởi tế bào T tự hoạt động nhắm mục tiêu đến vỏ myelin [ 10 , 11 ]. Chúng tôi đã chỉ ra rằng CBD làm giảm thâm nhập miễn dịch thần kinh trung ương, kích hoạt vi tế bào và tổn thương trục ở những con chuột EAE này [ 12]. Các quan sát của chúng tôi đã được các nhóm khác xác nhận [ 13 – 15 ]. Cơ chế của các hoạt động CBD điều tiết có lợi này vẫn chưa được hiểu rõ.

Các bệnh lý tự miễn dịch, bao gồm MS / EAE, được thúc đẩy bởi các tập hợp con tế bào T đã biến đổi được gọi là tế bào T bộ nhớ. Các tế bào T ghi nhớ hoạt động tự động này được bắt mồi giả bởi các tế bào trình diện kháng nguyên (APC) để nhắm mục tiêu các tế bào của chính chúng, dẫn đến thoái hóa mô và phát triển bệnh bao gồm bệnh tiểu đường loại I, viêm khớp dạng thấp và MS. Tế bào T bộ nhớ thể hiện tiềm năng tăng sinh cao để phản ứng với tự kháng nguyên cùng với chức năng tác động gây bệnh cao được kiểm soát bởi các con đường tín hiệu cụ thể [ 16]. Tế bào T bộ nhớ tự miễn dịch (bao gồm cả những tế bào nhắm mục tiêu đến vỏ myelin và dẫn đến sự phát triển MS) tiết ra interleukin (IL) -17 cytokine trong thụ thể mồ côi liên quan đến thụ thể axit retinoic γ-T (RORγt) / đầu dò tín hiệu và chất kích hoạt phiên mã 3 (STAT3) – cách thức phụ thuộc và được xác định là kiểu hình Th17 tự miễn dịch [ 17 – 19 ]. Việc chuyển giao thông qua các dòng tế bào T gây não như vậy sang động vật khỏe mạnh dẫn đến các triệu chứng giống MS nhanh chóng và nghiêm trọng [ 20 , 21 ] và sự kích hoạt lại kháng nguyên của các tế bào T nhớ tuần hoàn, không hoạt động có thể góp phần làm tái phát MS ở các dạng MS tái phát – tái phát [ 22 ]. Việc nhắm mục tiêu trị liệu đối với các tế bào T bộ nhớ này dường như rất khó mặc dù chiến lược này đã được chứng minh là hiệu quả [23 ].

Tác động của cannabinoids, bao gồm CBD, đối với các tế bào T bộ nhớ đặc hiệu kháng nguyên này dẫn đến các bệnh lý tự miễn dịch chưa được mô tả rõ ràng và cơ chế của các hoạt động này không được biết đến. Gần đây chúng tôi đã chỉ ra rằng CBD có thể làm giảm chức năng của các tế bào Th17 gây não. Sử dụng dòng tế bào T bộ nhớ đặc hiệu với myelin cao nhận biết biểu mô myelin MOG35-55 (T MOG ), chúng tôi đã chỉ ra rằng CBD làm giảm sản xuất và giải phóng IL-17 từ các tế bào T MOG gây não cũng như IL-6 [ 24 ], một cytokine kiểm soát sự biệt hóa Th17 [ 25 ]. CBD cũng làm giảm quá trình phosphoryl hóa STAT3 [ 26 ], một con đường được biết đến để kiểm soát chức năng giống Th17 của các tế bào MOG bộ nhớ [27 ]. Song song, chúng tôi quan sát thấy CBD thúc đẩy quá trình chống viêm trong các tế bào T bộ nhớ được kích hoạt này bao gồm tăng sản xuất cytokine IL-10 chống viêm và tăng hoạt động của một số yếu tố phiên mã điều hòa bao gồm STAT5 và EGR2 [ 26 ].

Để nghiên cứu các cơ chế phiên mã liên quan đến các hiệu ứng điều hòa miễn dịch CBD, chúng tôi đã lập hồ sơ biểu hiện gen trong tổng số mRNA được phân lập từ các tế bào T MOG hoạt hóa được điều trị bằng CBD sử dụng vi mạch. Các phân tích tin sinh học chi tiết cho phép chúng tôi xác định mạng lưới gen, con đường và các cơ quan điều hòa ngược dòng làm trung gian cho các tác động ức chế CBD. Chúng tôi chỉ ra rằng CBD điều chỉnh giảm quá trình phiên mã của các gen tiền viêm khác nhau kiểm soát chức năng Th17 của tế bào T tạo não trong khi tăng cường chương trình di truyền chống tăng sinh phụ thuộc IFN và tăng cường sự biểu hiện của các gen cản trở sự giao tiếp APC / T và trình bày kháng nguyên. Hơn nữa, một số bản sao chống oxy hóa có tác dụng chống viêm đã được điều chỉnh bởi CBD trong các tế bào T bộ nhớ được kích hoạt.

Đi đến:

Phương pháp

Thuốc thử

Peptide MOG35-55 đông khô [MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK] được mua từ GenScript (Piscataway, NJ, USA) được hoàn nguyên trong PBS vô trùng và dung dịch gốc được bảo quản trong nồi cách thủy ở -20 ° C. CBD (vui lòng lấy từ Giáo sư Raphael Mechoulam, Đại học Hebrew của Jerusalem, Israel) được hòa tan trong ethanol. Liều 5 μM CBD được sử dụng ở đây được lựa chọn dựa trên các nghiên cứu trước đây của chúng tôi, trong đó chúng tôi cho thấy CBD ở nồng độ này ức chế đáng kể sự tăng sinh tế bào T MOG do MOG35-55 gây ra và hoạt động Th17 của chúng, tức là sự biểu hiện và phóng thích IL-17 [ 12 , 24 , 26 ]. Huyết thanh bê thai (FCS) và các thuốc thử nuôi cấy mô khác được lấy từ Công nghiệp sinh học (Kibbutz Beit HaEmek, Israel).

Kích thích T MOG và tinh sạch vi hạt CD4 + từ đồng nuôi cấy APC / T MOG

Dòng tế bào T đặc hiệu MOG35-55 (T MOG ) được duy trì như mô tả trước đây [ 12 , 24 , 26 , 28 ]. APC mới được phân lập từ lá lách của những con chuột đực C57BL / 6 mới 8 tuần tuổi ngay trước khi thí nghiệm. Tế bào lá lách phân ly được mạ (50 × 10 6 tế bào / bản 10 cm) trong môi trường RPMI-1640 có chứa 2,5% FCS, 100 μg / ml streptomycin, 100 U / ml penicillin, 2 mM L-glutamine và 50 μM β-mercaptoethanol . Sau 2 giờ ở 37 ° C trong không khí được làm ẩm 5% CO2 để cho phép APC bám dính, môi trường có các tế bào không kết dính được loại bỏ và các APC kết dính được rửa nhẹ bằng PBS có chứa Ca ++ / Mg ++ và được phủ bằng môi trường mới. Sau đó, 2,5 × 10 6tế bào T MOG được thêm vào và đồng nuôi cấy APC / T MOG được kích thích ngay lập tức với 5 μg / ml MOG35-55 trong 8 giờ khi có hoặc không có CBD ở 5 μM. Thời gian ủ 8 giờ được chọn dựa trên các thí nghiệm đáp ứng thời gian và liều lượng trước đó [ 24 , 26 , 29 ]. CBD đã được thêm vào ngay trước khi bổ sung MOG35-55. Sau 8 giờ ủ, môi trường chứa hầu hết các tế bào T MOG (nhưng không phải tế bào APC kết dính) được thu thập cẩn thận và quay trong 10 phút ở tốc độ 2.000 vòng / phút. Viên tế bào được rửa trong PBS chứa 0,5% BSA và 2 mM EDTA, được ly tâm một lần nữa, và được tiếp tục trong 90 μl dung dịch đệm này. Để cải thiện độ tinh khiết của các tế bào được thu thập, các hạt từ tính CD4 (L3T4) (Miltenyi Biotec GmbH, Bergisch Gladbach, Đức) được thêm vào huyền phù tế bào để chọn lọc dương tính các tế bào CD4 + như đã mô tả trước đó [ 26 , 29 ]. MRNA được phân lập từ các tế bào T MOG tinh khiết được phân tích biểu hiện microarray mRNA toàn cầu, sau đó là phản ứng chuỗi polymerase phiên mã ngược theo thời gian thực định lượng (qPCR) để xác nhận các sản phẩm gen đã chọn.

Tách chiết RNA, phân tích bản sao microarray và xác nhận bằng qPCR

Tế bào T MOG tinh khiết đã được ly giải và được chiết tách RNA ( 5Prime , Darmstadt, Đức) như đã mô tả trước đó [ 26 , 29 , 30 ]. Đối với phân tích microarray so sánh, 200 ng RNA tổng số được khuếch đại, đánh dấu và lai ghép vào Illumina MouseRef-8 v 2.0 Expression Bead-Chip ( Illumina Inc. , San Diego, CA, USA) như đã mô tả trước đó [ 26 , 29]. Dữ liệu thô đã được chuyển đổi log2 và chuẩn hóa bằng cách sử dụng chuẩn hóa lượng tử. Dữ liệu được trình bày trong toàn bộ bản thảo dưới dạng thay đổi gấp trừ khi có quy định khác. Phân tích microarray thống kê và phân tích biểu hiện gen của dữ liệu thô được thực hiện tại Trung tâm Tin học về Di truyền thần kinh và lõi Neurogenomics tại UCLA bằng cách sử dụng tập lệnh R ( www.r-project.org ) và các gói Bioconductor ( http://www.bioconductor.org ; [ 31 ]) như được mô tả [ 32 ] .

Các phân tích về lộ trình và chức năng toàn cầu được thực hiện bằng Phân tích Lộ trình Tài năng của QIAGEN (IPA®, QIAGEN Redwood City CA, USA www.qiagen.com/ingenuity ). Các gen đáp ứng ngưỡng giá trị p là 0,005 cho biểu hiện khác biệt được sử dụng để xây dựng mạng lưới gen bằng các công cụ IPA.

Phân tích mạng đồng biểu hiện gen có trọng số (WGCNA; [ 33 ]) ( http://labs.genetics.ucla.edu/horvath/htdocs/CoexpressionNetwork/) đã được áp dụng để hoàn thành việc xác định đặc điểm chức năng của dữ liệu biểu hiện gen. WGCNA là một phương pháp phân tích công nhận các mạng đồng biểu hiện dựa trên sự chồng chéo cấu trúc liên kết giữa các gen và xem xét mối tương quan của hai gen với nhau và mức độ tương quan được chia sẻ của chúng trong mạng. Tóm lại, các gen hiện diện nhất quán trên các mảng có hệ số hiệp biến cao và kết nối cao đã được chọn để xây dựng mạng và được phân nhóm theo thứ bậc. Các cụm gen (mô-đun) có liên kết cao được xác định dựa trên sự chồng chéo cấu trúc liên kết của chúng bằng cách sử dụng một thuật toán cắt cây động. Các mô-đun như vậy đã được trực quan hóa bằng VisANT ( http://visant.bu.edu). Mẫu biểu hiện gen được cô đọng trong một mô-đun thành “mô-đun eigengene” (ME), là một bản tóm tắt có trọng số về biểu hiện gen trong mô-đun và có thể tương quan với các đặc điểm. Mối quan hệ giữa các gen trong mô-đun có thể được xác định và các phân tích tiếp theo có thể tập trung vào các gen trung tâm (gen có kết nối cao nhất trong mô-đun) và các con đường tương ứng thúc đẩy thay đổi biểu hiện gen mà không có bất kỳ giả định trước nào về chức năng của gen. Ở giai đoạn cuối, các mô-đun quan tâm được chú thích bằng cách sử dụng các danh mục chức năng và sinh học của bản thể gen (GO) bằng công cụ trực tuyến ( http://geneontology.org ). Phương pháp WGCNA đã được sử dụng trong một số lượng lớn các nghiên cứu phiên mã gần đây để tiết lộ mạng lưới gen chức năng [ 34 , 35 ].

phân tích qPCR

Các sản phẩm gen đã chọn được tìm thấy bằng phân tích microarray bị ảnh hưởng bởi CBD đã được xác nhận bởi qPCR như được mô tả [ 26 , 30 ]. CDNA của mỗi gen đã chọn được khuếch đại bằng cách sử dụng một cặp mồi cụ thể được trình bày trong tệp Bổ sung 1 : Bảng S1. Sản phẩm gen β2-microglobulin (β2mg) được sử dụng để bình thường hóa [ 30 ]. Các lần chạy qPCR được lặp lại 3–4 lần bằng cách sử dụng các chế phẩm mRNA từ các thí nghiệm độc lập.

Xét nghiệm ELISA

Xét nghiệm hấp thụ miễn dịch liên kết với enzym (ELISA) đã được thực hiện như đã mô tả trước đó [ 24 ]. Trong thời gian ngắn, các tế bào T MOG được nuôi cấy trong môi trường xét nghiệm trong các đĩa 24 giếng (0,25 × 10 6 tế bào / giếng) cùng với APC lách (5 × 10 6 tế bào / giếng). CBD ở 5 μM được thêm vào các tế bào ngay trước khi bổ sung MOG35-55 ở 5 μg / ml. Sau 24 giờ ủ, môi trường điều hòa tế bào được thu thập, chia nhỏ và phân tích nồng độ IL-1β và IL-3 bằng ELISA ( R&D Systems , Minneapolis, MN, USA). Thời gian ủ trong 24 h được chọn dựa trên các quan sát trước đây của chúng tôi [ 24 ].

Phân tích thống kê dữ liệu qPCR và ELISA

Dữ liệu qPCR và ELISA được biểu thị dưới dạng giá trị trung bình ± SEM của 3–4 thí nghiệm độc lập và được phân tích ý nghĩa thống kê bằng cách sử dụng phân tích phương sai một cách (ANOVA), tiếp theo là bài kiểm tra sau học của Newman-Keul. p  <0,05 được coi là có ý nghĩa. Chương trình Graph Pad Prism (La Jolla, CA, USA) được sử dụng để phân tích thống kê dữ liệu.

Đi đến:

Các kết quả

Hồ sơ biểu hiện gen của các tế bào T MOG hoạt hóa được điều trị bằng CBD

Gần đây chúng tôi đã mô tả hồ sơ biểu hiện gen chi tiết của T MOG được kích hoạt bởi MOG35-55 [ 29 ] và chứng minh tác dụng tiền viêm mạnh mẽ của sự hoạt hóa MOG35-55 ở cấp độ phiên mã xác nhận chức năng Th17 của các tế bào T MOG đã được hoạt hóa [ 24 , 26 ].

Ở đây, chúng tôi đã xem xét tác động của đồng ủ CBD lên cấu hình phiên mã gây ra MOG35-55 của T MOG . Mẫu mRNA được chế biến từ tinh khiết T MOG tế bào (CD4 + lựa chọn tích cực), đồng nuôi trước đó với trước gắn APC, và kích thích với MOG35-55 lúc 5 mg / ml trong 8 h trong sự hiện diện hay vắng mặt của CBD tại 5 μM.

Phân tích microarray dựa trên ngưỡng p  <0,005 cho thấy 2755 bảng điểm (trong khoảng 25.600 mục tiêu hiện diện trên bộ Illumina này ) được điều chỉnh khác biệt giữa các phương pháp điều trị. Trong số này, kích thích với MOG35-55 đã điều chỉnh sự biểu hiện của 842 bản sao gen và 1094 đầu dò gen được điều hòa (Hình. 1a). Việc bổ sung CBD vào các tế bào T MOG được kích thích bằng MOG35-55 đã dẫn đến tổng số 968 bản sao gen điều chỉnh và trong 1330 bản sao điều chỉnh giảm so với mẫu đối chứng (không có CBD và MOG35-55). Trong số này, 81 sản phẩm gen được điều hòa đáng kể ( p  <0,005) bằng cách bổ sung CBD và 82 sản phẩm gen được điều hòa bởi CBD so với mức được quan sát thấy trong các tế bào được kích thích MOG35-55 không có CBD (Hình. 1b). Tế bào T MOG được kích thích bằng MOG35-55 đơn lẻ hoặc được đồng ủ với CBD có chung 627 sản phẩm gen điều hòa và 852 gen điều hòa. Hai mươi tám bản sao được điều hòa và 30 bản sao điều chỉnh giảm trong các tế bào T MOG được ủ với CBD được cung cấp một mình hoặc bằng sự kết hợp CBD + MOG35-55. Chỉ có một sản phẩm gen được điều chỉnh giảm bởi kích thích chỉ MOG35-55 và điều trị chỉ bằng CBD. Điều thú vị là, 13 bảng điểm cá nhân luôn được điều chỉnh và 37 bảng điểm luôn được điều chỉnh giảm trong mọi điều kiện thí nghiệm.

Tệp bên ngoài chứa hình ảnh, hình minh họa, v.v. Tên đối tượng là 12974_2016_603_Fig1_HTML.jpg
Hình 1

Số lượng bản mã gen bị ảnh hưởng trong các tế bào T MOG được kích thích bằng MOG35-55 khi có hoặc không có CBD. mRNA được chuẩn bị từ tế bào T MOG được đồng nuôi cấy với APC và được kích thích bằng MOG35-55 khi có hoặc không có CBD được phân tích microarray như mô tả trong Phương pháp. Số lượng các bản sao được thể hiện một cách khác biệt được điều chỉnh tăng đáng kể ( màu đỏ ) hoặc điều chỉnh giảm ( màu xanh lá cây ) trong các điều kiện điều trị khác nhau so với các tế bào không được điều trị đối chứng ( p  <0,005). b Biểu đồ Venn minh họa số lượng các bản sao bị ảnh hưởng (điều hòa lên và xuống) bởi các nghiệm thức CBD, MOG35-55 hoặc CBD + MOG35-55 ( tr <0,005) và sự chồng chéo của chúng

Tạo gen bằng phân tích gen

Chỉ các gen đạt tiêu chuẩn p  <0,005 và thay đổi lần lượt là 0,2 (tức là thay đổi 20%) mới được đưa vào phân tích sâu hơn về ảnh hưởng của CBD đối với hoạt động phiên mã của T MOG được kích thích . Một số phương pháp tiếp cận đã được sử dụng để mô tả đặc điểm điều chế CBD của sự hoạt hóa tự kháng nguyên của T MOG . Những điều này bao gồm (1) nhận dạng các bảng điểm ức chế CBD nhất trong các bảng điểm được kích hoạt bởi MOG35-55, (2) nhận dạng các bảng điểm được điều chỉnh MOG35-55 không bị ảnh hưởng bởi CBD, (3) xác định các bảng điểm được điều chỉnh CBD nhiều nhất , và (4) xác định ảnh hưởng của CBD lên các gen điều hòa MOG35-55.

Bàn 1hiển thị các bảng điểm được điều chỉnh bằng cách kích thích với MOG35-55 và giảm đáng kể khi có CBD. Những phiên mã này bao gồm: các cytokine như mRNA Il3 (giảm 72% bởi CBD), Il1b mRNA (giảm 70%), Xcl1 (giảm 49%), và Il12a (24%); mRNA của thụ thể cytokine và chemokine (ví dụ: Ifngr1 là 60%, Cxcr1 là 50%); các yếu tố phiên mã và điều hòa ( Crem 50%, Ier3 31%, Atf3 28%); TNF-các thành viên báo hiệu gia đình ( Tnfrsf18 tăng 40%, Tnfsf11 và Tnfsf14 tăng 30%, Tnfrsf9giảm 21%); các yếu tố tín hiệu bao gồm những yếu tố ảnh hưởng đến độ bám dính ( Amica1 tăng 21%), tăng trưởng ( Igfbp4 tăng 50%), cấu trúc tế bào và vận chuyển ( Vps37b 60%, Tubb2d 50%) cũng như tổng hợp và chuyển hóa lipid / cholesterol ( Dgat1 là 60% , Fdps giảm 50%). Những thay đổi này cho thấy CBD có tác động ngăn chặn sâu sắc các gen được kích hoạt MOG35-55 khác nhau trong tế bào T MOG . Một số bản sao gen đã bị giảm bởi điều trị kết hợp CBD + MOG35-55 (chỉ so với MOG35-55) cũng bị giảm khi ủ với CBD đơn thuần ( so với đối chứng) bao gồm Il1b (70%), Cxcr1(tăng 30%), Ifngr1 (60%), Crem (50%), Tnfrs18 (50%), Igfbp4 (50%), Vps37b (60%), Tubb2b (50%), Fdps ( 50%) và Dgat1 (60%).

Bảng 1

Danh sách các bản sao mà biểu hiện được điều chỉnh bởi kích thích MOG35-55 và điều chỉnh tăng này bị CBD ức chế ( p  <0,005)

Biểu tượng Tên gen Số gia nhập MOG một mình [gấp] $ MOG + CBD [gấp] $ Thay đổi [%] Riêng CBD [gấp] $
Cytokine, chemokine và thụ thể
 Xcl1 Phối tử Chemokine (C motif) 1 NM_008510.1 30.0 15.3 −49% 1,0
 Il3 Interleukin 3 NM_010556.2 25.4 7.2 −72% 1,0
 Cxcl9 Phối tử Chemokine (CXC motif) 9 NM_008599 7.4 5,4 −27% 0,9
 Gpr83 Thụ thể kết hợp với protein G 83 NM_010287 3,9 1,8 −53% 0,9
 Il12a Interleukin 12A NM_008351 2.3 1,5 −24% 0,9
 Cxcr1 Thụ thể chemokine (mô típ CXC) 1 (Il8ra, CD181) NM_178241.1 1,7 0,9 −50% 0,7
 Il1b Interleukin 1, beta NM_008361 1,5 0,5 −70% 0,3
 Ifngr1 Thụ thể gamma interferon 1 NM_10511.1 0,8 0,3 −60% 0,4
Yếu tố phiên mã và chất điều hòa
 Ier3 Phản hồi sớm ngay lập tức 3 NM_133662.1 5.5 3.8 −31% 1,3
 Atf3 Kích hoạt yếu tố phiên mã 3 NM_007498,2 4,7 3,4 −28% 1.1
 Nr4a3 Thụ thể hạt nhân phân họ 4, nhóm A, thành viên 3 NM_015743.1 4.1 3.2 −22% 1,0
 Hỏa táng cAMP bộ điều chế phần tử đáp ứng NM_013498 1,9 0,9 −50% 0,5
TNF-phần tử tín hiệu gia đình
 Tnfsf11 Phối tử yếu tố hoại tử khối u Thành viên siêu họ 11 ( Chất kích hoạt thụ thể của phối tử yếu tố hạt nhân kappa-B (RANKL)) NM_011613.2 11,8 8.2 −31% 0,9
 Tnfsf14 Nhân tố hoại tử khối u phối tử thành viên siêu họ 14 NM_019418.1 5.0 3.5 −30% 1,0
 Tnfrsf9 Siêu họ thụ thể yếu tố hoại tử khối u, thành viên 9 NM_011612.2 4.2 3,3 −21% 0,8
 Tnfrsf18 Siêu họ thụ thể yếu tố hoại tử khối u, thành viên 18 NM_009400.1 1,3 0,7 −40% 0,5
Các yếu tố báo hiệu
 Sphk1 Sphingosine kinase NM_011451 12.3 8.2 −34% 1,0
 Amica1 Phân tử kết dính tương tác với kháng nguyên CXADR NM_001005421.2 5.0 3,9 −21% 1,2
 Axud1 Protein hạt nhân giàu cysteine / serine 1 / Protein apoptosis gây ra TGF-beta 3 NM_153287.2 4.4 3.5 −20% 0,9
 Cdk5r1 Chất hoạt hóa kinase 5 phụ thuộc Cyclin 1 NM_009871,2 3,9 3.1 −20% 0,9
 Igfbp4 Protein liên kết yếu tố tăng trưởng giống insulin 4 NM_010517.2 2.3 1.1 −50% 0,5
 Vps37b Phân loại protein trong không bào 37 chất tương đồng B NM_177876.2 1,5 0,6 −60% 0,4
 Dgat1 Diacylglycerol O-acyltransferase 1 NM_010046.2 1,0 0,4 −60% 0,4
 Tubb2d Tubulin, beta 2b NM_023716.1 0,8 0,5 −50% 0,5
 Fdps Farnesyl diphosphat tổng hợp NM_134469 0,8 0,4 −50% 0,5
Mở trong một cửa sổ riêng

$ Kết quả được trình bày dưới dạng thay đổi lần đầu so với kiểm soát (không có MOG35-55 hoặc CBD). Các con số in nghiêng cho thấy tác động đáng kể của riêng CBD (p <0,005) trong T MOG không được kích thích

Điều quan trọng cần lưu ý (xem Bảng 2) rằng một số bảng điểm tiền viêm được điều chỉnh bằng MOG35-55 không bị ảnh hưởng bởi CBD (được đưa ra khi có mặt MOG35-55). Chúng bao gồm bản sao của một số cytokine (ví dụ: Csf2 , Tnf, Ifng ), chemokine điều chỉnh MOG35-55 (ví dụ, Ccl3 , Ccl4 , Cxcl10 ), glycoprotein điều tiết (ví dụ, Sema7a ), yếu tố phiên mã làm trung gian cho cơ chế dung nạp ( Egr2 , Egr1 ) và một số bộ điều chỉnh phiên mã và tín hiệu liên quan đến IFN (ví dụ: Tbx21 , Ifit3 ).

ban 2

Danh sách các bảng điểm mà biểu hiện được điều chỉnh bởi kích thích MOG35-55 và không bị ảnh hưởng bởi CBD

Biểu tượng Tên gen Số gia nhập MOG một mình [gấp] $ MOG + CBD [gấp] $ Riêng CBD [gấp] $
Cytokine
 Csf2 Yếu tố kích thích khuẩn lạc 2 NM_009969.2 77.0 67.1 1.1
 Tnf Yếu tố hoại tử khối u alpha NM_013693.1 15.3 13,8 1.1
 Ifng Interferon gamma NM_008337.1 10,8 9.5 0,8
Chemokines
 Ccl3 Phối tử Chemokine (CC motif) 3 NM_011337.1 54.1 48,6 0,9
 Ccl4 Phối tử Chemokine (CC motif) 4 NM_013652.1 40,2 37.3 0,9
 Cxcl10 Phối tử Chemokine (CXC motif) 10 NM_021274.1 9.0 9,8 0,9
Glycoprotein
 Sema7a Semaphorin 7A (neo màng GPI) NM_011352.2 4,6 4.3 0,8
Các yếu tố phiên mã
 Egr2 Phản ứng tăng trưởng sớm 2 NM_010118.1 20.1 18,9 1,3
 Egr1 Phản ứng tăng trưởng sớm 1 NM_007913.2 10,7 11,7 1,5
 Tbx21 Hộp chữ T 21 NM_019507.1 2,2 2,5 0,9
Các yếu tố báo hiệu
 Ndrg1 N-myc hạ nguồn quy định 1 NM_010884.1 6.2 6,7 2,5
 Ifit3 Protein do interferon tạo ra với tetratricopeptide lặp lại 3 NM_010501.1 5,6 5,9 0,9
Mở trong một cửa sổ riêng

$ Kết quả được trình bày dưới dạng thay đổi lần đầu so với kiểm soát (không có MOG35-55 hoặc CBD). Các số in nghiêng cho thấy tác động đáng kể của riêng CBD ( p  <0,005)

Các bản sao gen đã được điều chỉnh đáng kể khi có CBD trong các tế bào T MOG được kích thích bằng MOG35-55 được liệt kê trong Bảng 3. Trong số các bản sao này, chúng tôi tìm thấy chủ yếu là các phân tử màng và xuyên màng được biết là điều chỉnh tiêu cực sự hoạt hóa tế bào T, ví dụ, thông qua sự gián đoạn của tương tác APC / T cũng như quá trình xử lý và trình bày kháng nguyên. Chúng bao gồm bảng điểm của Lag3 (tăng 210%), Btla (80%) và CD69 (39%). Hơn nữa, CBD được cho một mình hoặc kết hợp với MOG35-55 đã tăng cường phiên mã Trat1 (một thụ thể tế bào T ức chế CTLA-4 vận chuyển yếu tố nội bào vào màng) tương ứng là 60 và 200%. CBD có tác dụng thúc đẩy đáng kể hoạt động phiên mã của nhiều gen phụ thuộc IFN được biết đến để thực hiện các phản ứng chống tăng sinh do IFN điều khiển, bao gồm cả Mx2MRNA , Irf4 , Ifit2 , Ephx1 , Rsad2 ( Viperin ), Ets2 , Trim30 và Tyki . Ngoài ra, CBD có tác dụng nâng cao một số bản sao liên quan đến hoạt động và tín hiệu GTP, vận chuyển protein và luân chuyển trong các tế bào T như Tagap , Gfod1 , Tnfsf8 ( CD30 ), Nfatc1 , Gbp11 , Ppic , Dusp6 và Slc3a2 ( CD98 ) mARN.

bàn số 3

Danh sách các gen mà quá trình phiên mã được tăng cường bởi CBD trong tế bào T MOG ( p  <0,005)

Biểu tượng Tên gen Số gia nhập MOG một mình [gấp] $ MOG + CBD [gấp] $ Thay đổi [%] Riêng CBD [gấp] $
MOG35-55 được điều chỉnh và tăng cường CBD
Bộ điều chỉnh âm bề mặt
 Lag3 & Gen kích hoạt tế bào bạch huyết 3 NM_008479.1 1,7 5.2 +210% 1,7
 Btla Liên kết với tế bào lympho B và T NM_177584.3 1,8 3.2 +80% 2
 Cd69 Cụm phân biệt 69 XM_132882.1 3,9 5,4 +39% 1,4
Bảng điểm phụ thuộc IFN
 Rsad2 Miền gốc S-adenosyl methionine chứa 2 NM_021384.2 4,9 9.5 +94% 1,6
 Trim30 Mô-típ ba bên chứa 30 NM_009099 2,2 3.1 +40% 1.1
 Mx2 Myxovirus (vi rút cúm) kháng 2 NM_013606 6.0 8.2 +37% 1,0
 Irf4 Yếu tố điều hòa interferon 4 NM_013674.1 4,5 5.3 +18% 1,4
Các yếu tố báo hiệu
 Gbp11 Protein liên kết Guanylate 11 NM_01039647.1 3.2 7 +120% 1.1
 Ppic Peptidylprolyl isomerase C NM_008908.1 1,8 3.2 +80% 1,8
 Tyki Thymidylate kinase thành viên cảm ứng LPS NM_020557.3 4 5,7 +42% 1
 Tagap Kích hoạt tế bào T Protein kích hoạt RhoGTPase NM_145968.1 4,7 6.4 +35% 1,4
 Tnfsf8 Yếu tố hoại tử khối u (phối tử) siêu họ, thành viên 8 NM_009403.2 2,2 2,9 +31% 1.1
 Dusp6 Phosphatase đặc hiệu kép 6 NM_026268.1 3,4 4.3 +26% 1,4
 Gfod1 Miền oxy hóa glucoza-fructoza chứa 1 NM_001033399.1 6.2 7.8 +26% 1,0
 Nfatc1 & Yếu tố hạt nhân của tế bào T hoạt hóa, tế bào chất 1 NM_16791 3,3 4 +21% 1,3
Chỉ CBD được kiểm soát
Chống oxy hóa và chống viêm
 Mt1 Metallothionein 1 NM_013602.2 0,5 2.3 +330% 3
 Slc30a1 Nhóm chất vận chuyển chất rắn 30 (chất vận chuyển kẽm), thành viên 1 NM_009579 0,9 1,8 +100% 1,8
 Mt2 Metallothionein 2 NM_008630.1 1 1,9 +80% 2.3
Các chất điều hòa tiêu cực hoạt động của tế bào T
 Trat1 Bộ tiếp hợp xuyên màng liên kết với thụ thể tế bào T 1 NM_198297 0,7 2.1 +200% 1,6
Bảng điểm phụ thuộc IFN
 Ephx1 Epoxit hydrolase 1 NM_010145.2 0,7 1,8 +170% 2,4
 Ets2 Vi rút nguyên bào hồng cầu V-ets ở gia cầm NM_011809.2 1,3 2,4 +80% 1,3
Các yếu tố báo hiệu
 Ddr1 Thụ thể vùng Discoidin tyrosine kinase 1 NM_007584.1 1.1 3 +170% 2,4
 Pitpnm2 Protein chuyển phosphosphatidylinositol, liên kết với màng 2 NM_011256.1 1,2 2,9 +150% 2,6
 Gpnmb Glycoprotein (xuyên màng) nmb NM_053110.2 0,4 0,9 +90% 2,2
 Asb2 Ankyrin lặp lại và protein chứa hộp SOCS 2 NM_023049.1 0,29 0,52 +79% 1,38
 Slc3a2 Solute nhà cung cấp dịch vụ gia đình 3 thành viên 2 NM_008577,2 1,3 2.3 +70% 1,5
Mở trong một cửa sổ riêng

$ Kết quả được trình bày dưới dạng thay đổi lần đầu so với kiểm soát (không có MOG35-55 hoặc CBD). Các con số in nghiêng chỉ ra ảnh hưởng đáng kể của CBD ( p  <0,005) trong T MOG không được kích thích . & kết quả được báo cáo trước đây [ 25 ]

Một số bản sao bao gồm chất chống oxy hóa và chống viêm cũng như các chất điều hòa âm tính của hoạt động tế bào T đã được CBD tăng lên ngay cả khi chúng không bị ảnh hưởng bởi MOG35-55. Chúng bao gồm chất vận chuyển kẽm Slc30a1 , metallothioneins ( Mt1 và Mt2 ), heme oxygenase ( Hmox1 ), và mRNA của một protein bảo quản cân bằng nội môi lưới nội chất ( Herpud1 ) (Bảng 3, Hình. 2 và Các bác sĩ cho biết:and33).

Tệp bên ngoài chứa hình ảnh, hình minh họa, v.v. Tên đối tượng là 12974_2016_603_Fig2_HTML.jpg
Mở trong một cửa sổ riêng
Hình 2

Các thuật ngữ chức năng làm giàu CBD do IPA xác định trong các tế bào T MOG được kích hoạt . a Các gen hình thành chú thích ” Tăng sinh tế bào lympho T ” được phát hiện là bị ảnh hưởng bởi CBD ( b ). Các gen hình thành chú thích ” Sự khác biệt của tế bào Th17 ” được phát hiện là bị ảnh hưởng bởi CBD. Hướng thay đổi được mã hóa theo màu với màu xanh lá cây ngụ ý điều chỉnh giảm và màu đỏ ngụ ý điều chỉnh tăng. Giá trị log2 thể hiện sự thay đổi do CBD gây ra so với các ô chỉ được kích thích bởi MOG35-55 và giá trị p tương ứng được cung cấp bên dưới mỗi tên bảng điểm. Giải thích các ký hiệu được cung cấp trong Chú giải

Tệp bên ngoài chứa hình ảnh, hình minh họa, v.v. Tên đối tượng là 12974_2016_603_Fig3_HTML.jpg
Mở trong một cửa sổ riêng
Hình 3

Phân tích mạng lưới gen IPA về hiệu ứng CBD trong các tế bào T MOG được kích thích — Mạng 1. Phân tích mạng lưới các gen biểu hiện có ý nghĩa ( p  <0,005) bị ảnh hưởng bởi CBD trong các tế bào T MOG được kích thích bằng MOG35-55 được thực hiện bằng phần mềm IPA như được mô tả trong Phương pháp. Hiển thị mạng lưới, biểu tượng và mối quan hệ sinh học giữa các gen được giải thích trong Hình. 2. Các gen màu xám đã được hiển thị trong tài liệu để tương tác với các sản phẩm gen màu xuất hiện trong sơ đồ

Ở bước cuối cùng, chúng tôi tập trung vào bảng điểm điều chỉnh giảm MOG35-55 và nghiên cứu ảnh hưởng của CBD đối với mức độ của chúng. Bàn 4hiển thị danh sách một số bảng điểm bị ức chế MOG35-55 cao mà không bị ảnh hưởng bởi CBD. Danh sách bao gồm các đại diện của các họ gen và chức năng khác nhau. Điều thú vị là, sự kích hoạt MOG35-55 dẫn đến sự giảm đáng kể trong quá trình phiên mã của một số thụ thể IL-17 ( Il17re , biến thể phiên mã 2 , Il17re biến thể 1 và Il17rc ; xem thêm [ 29 ]) và sự điều hòa giảm này không bị ảnh hưởng bởi sự hiện diện của Khu trung tâm.

Bảng 4

Các gen điều hòa thấp nhất MOG35-55 ( p  <0,005) không bị ảnh hưởng bởi CBD

Biểu tượng Định nghĩa Gia nhập MOG một mình [gấp] $ MOG + CBD [gấp] $ Riêng CBD [gấp] $
Il17re Interleukin 17 thụ thể E, biến thể 2 NM_001034029.1 0,23 0,23 1,04
Sytl2 Synaptotagmin-like 2, biến thể 5 NM_001040088.1 0,25 0,27 1,03
Il17re Interleukin 17 thụ thể E, biến thể 1 NM_145826.2 0,26 0,27 1.11
Tmem176a Protein xuyên màng 176A NM_025326.2 0,28 0,30 1,07
Ian3 Nucleotide liên kết miễn dịch 3 NM_146167,2 0,29 0,23 0,94
Klrd1 Thụ thể giống lectin của tế bào sát thủ, phân họ D, thành viên1 NM_010654.1 0,30 0,29 0,95
Klri2 Họ thụ thể giống lectin của tế bào sát thủ I thành viên 2 NM_177155.2 0,31 0,35 1,01
Sit1 Ức chế cảm ứng bộ chuyển đổi xuyên màng 1 NM_019436.1 0,32 0,29 0,84
Il17rc Interleukin 17 thụ thể C NM_134159.2 0,33 0,36 0,95
Golph2 Protein xuyên màng Golgi loại II NM_027307 0,35 0,35 0,94

$ Kết quả được trình bày dưới dạng thay đổi lần đầu so với kiểm soát (không có MOG35-55 hoặc CBD)

Xác định các mạng chức năng bị ảnh hưởng bởi CBD trong T MOG được kích hoạt

Như đã mô tả ở trên, việc xử lý CBD đối với các tế bào T MOG được xử lý bằng MOG35-55 dẫn đến điều hòa 81 bản sao và điều chỉnh giảm 82 bản sao. Các gen này được tải lên chương trình phân tích IPA để xác định các tập hợp con chức năng, con đường, mạng lưới gen và các cơ quan điều hòa ngược dòng mà CBD nhắm mục tiêu. Nhân vật 2minh họa hai thuật ngữ chức năng GO làm giàu CBD được IPA xác định trong các tế bào MOG T được hoạt hóa , “ Tăng sinh tế bào lympho T ” (Hình. 2a) và “ Sự khác biệt của các tế bào Th17 ” (Hình. 2b). Các “ phổ biến vũ khí của bào lympho T ” chú thích chức năng đã được công nhận bởi IPA được upregulated trong hoạt T MOG là kết quả của CBD đồng ủ bệnh do phiên mã upregulated của Pycard , Ptpn6 , Gfi1 , Hmox1 , Btla , Lag3 , Il21 , Slc3a2 và Vav3 mRNA và do sự triệt tiêu song song của Tg , Dusp10 , Socs3 , Tsc22d3 , Ifngr1 , Tnfsf18 , Cd40 , Il1b ,MRNA Ubash3a và Srf (Hình. 2a). Ngoài ra, trong “ Cách phân biệt TH17 tế bào ” chú thích, IPA phân loại upregulated Il21 , Ptpn6 , Slc3a2 và downregulated Il1b , Socs3 , và Ifngr1 bảng điểm và nhận ra nó bị dập tắt bởi CBD trong kích thích T MOG (Hình. 2b).

Phân tích IPA đã xác định một số con đường kinh điển khác bị ảnh hưởng bởi CBD trong T MOG được kích thích bởi MOG35-55 (Bảng 5). Chúng bao gồm “ tín hiệu IL-10 ” và “ tín hiệu IL-6 ” ( p  <0,005), tiếp theo là “ tín hiệu qua trung gian cAMP ”, “ tín hiệu IGF-1 ”, “ thực bào qua trung gian thụ thể Fcg trong đại thực bào và bạch cầu đơn nhân ”, “ Siêu đường dẫn sinh tổng hợp cholesterol ”và con đường“ biệt hóa tế bào T trợ giúp ”(p <0,05).

Bảng 5

“Con đường chuẩn hàng đầu ” do IPA xác định được làm giàu bằng cách điều trị CBD trong các tế bào T MOG được kích thích

Đường dẫn hợp quy Các gen được chú thích giá trị p
Báo hiệu IL-10 Hmox1 , Il1b , Jun , Socs3 0,0039
Báo hiệu IL-6 Il1b , Jun , Socs3 , Srf , Vegfa 0,0042
tín hiệu qua trung gian cAMP Crem , Fpr2 , Gnal , Grm6 , Hrh3 0,024
Tín hiệu IGF-1 Igfbp4 , Jun , Socs3 , Srf 0,015
Thực bào qua trung gian thụ thể Fcγ ở đại thực bào và bạch cầu đơn nhân Appc3 , Hck , Hmox1 , Vav3 0,012
Con đường siêu tổng hợp cholesterol Fdps , Sqle 0,016
T helper biệt hóa tế bào CD40 , Ifbgr1 , Il21 0,042

IPA đã xác định mạng lưới gen bị ảnh hưởng bởi CBD trong các tế bào MOG T được kích thích bằng MOG35-55 (Hình. 3 và Các bác sĩ cho biết:và 4).4). Trong các mạng gen này, IPA biểu thị các bộ điều hòa ngược dòng chính có chức năng được điều chỉnh bởi CBD. Theo đó, Mạng 1 (Hình. 3) liên kết các tác động của CBD với điều chế IL-4, STAT5B, SATB1, CD28, NRF2 / NFE2L2 và NRF1 trong khi Mạng 2 (Hình. 4) liên kết các tác động của CBD với IL-2 và IL-1β cũng như với NFKB1 và EGR2.

Tệp bên ngoài chứa hình ảnh, hình minh họa, v.v. Tên đối tượng là 12974_2016_603_Fig4_HTML.jpg
Mở trong một cửa sổ riêng
Hình 4

Phân tích mạng gen IPA về điều chế CBD của các tế bào T MOG được kích thích — Mạng 2. Xem Hình. 2 và Các bác sĩ cho biết:and33 để biết chi tiết

Nhìn chung, chúng tôi cho thấy ở đây có nhiều cytokine, chemokine, thụ thể và các con đường truyền tín hiệu được điều chỉnh bởi CBD (Bảng 1, Hình. 1 và Các bác sĩ cho biết:và 2)2) so với quy định (Bảng 3) phù hợp với việc giảm sự tăng sinh tế bào T MOG và chức năng Th17 của chúng được chúng tôi cho thấy trước [ 12 , 24 ]. Tuy nhiên, trong số các gen điều hòa, chúng tôi tìm thấy chủ yếu các phân tử tế bào T điều hòa được biết là có tác dụng ức chế sự tăng sinh và hoạt động của tế bào T.

Xác thực bởi ELISA và qPCR

Một số sản phẩm gen được xác định bằng phân tích microarray là được điều chỉnh khác biệt đã được xác nhận bởi qPCR sử dụng β2-microglobulin làm gen tham chiếu) hoặc bằng ELISA (để định lượng sự tiết protein). Nhân vật 5acho thấy rằng sự kích thích T MOG với MOG35-55 dẫn đến tăng tiết protein IL-1β và việc ủ chung với CBD làm giảm nó trở lại mức kiểm soát. Hơn nữa, T MOG kích thích với MOG35-55 tăng bài tiết IL-3 bởi khoảng mười lần và mức này đã được dập tắt bởi CBD bằng 40% (Hình. 5b).

Một tệp bên ngoài chứa hình ảnh, hình minh họa, v.v. Tên đối tượng là 12974_2016_603_Fig5_HTML.jpg
Hình 5

ELISA của các cytokine IL-1β và IL-3 được giải phóng từ các tế bào T MOG được kích thích bằng MOG35-55 khi có hoặc không có CBD. APC / T MOG được kích thích với MOG35-55 ở 5 μg / ml trong 24 giờ khi có hoặc không có CBD ở 5 μM và lượng ( a ) IL-1β và ( b ) IL-3 trong môi trường nuôi cấy được xác định . 100% tương đương với hiệu ứng MOG35-55 tối đa, nghĩa là 15 ± 6 pg / ml đối với IL-1β và đến 377 ± 100 pg / ml đối với IL-3. Thống kê (một chiều ANOVA) và ký hiệu: a F (3,6) = 6,7, p  <0,05. b F (3,15) = 80,25, p  <0,001; Ký hiệu: p  <0,05, ### p <0,01 so với Kiểm soát, * p  <0,05, *** p  <0,001 so với các tế bào được kích thích MOG-35-55

Bàn 6cho thấy các ví dụ về phân tích qPCR của các sản phẩm gen đã chọn trong các tế bào T MOG được kích thích . Kích thích T MOG với MOG35-55 dẫn đến sự điều chỉnh cao mức mRNA của chemokine Xcl1 (62,7 lần) và mức này đã bị CBD ức chế khoảng bốn lần. Sự biểu hiện của Il12a cũng tăng lên bởi MOG35-55 (4,3 lần) và giảm xuống 2,6 lần khi CBD được thêm vào các tế bào T MOG được kích thích bằng MOG35-55 . Sự kích thích của các tế bào T MOG với MOG35-55 cũng tăng lên biểu hiện của Dusp6gấp 2,4 lần, tăng gấp 2,4 lần khi đồng ủ với CBD (khoảng 40%). Bảng cũng cho thấy một số gen khác mà quá trình phiên mã đã được tăng cường đáng kể chỉ nhờ CBD bao gồm Btla, Lag3 và Irf4 . Phiên mã của Btla, Lag3 và Irf4 được tăng thêm khi MOG35-55 và CBD được thêm vào cùng nhau. Điều thú vị là Il10 mRNA chỉ được tăng lên khi MOG35-55 và CBD được áp dụng cùng nhau nhưng không tuân theo MOG35-55 hoặc CBD được cho riêng lẻ. Những quan sát này phù hợp với biểu hiện mRNA được quan sát bằng phương pháp cấu hình gen.

Bảng 6

Xác thực qPCR của các phiên mã khác nhau trong mRNA được chuẩn bị từ các tế bào T MOG được kích thích bằng MOG35-55 và tác động của CBD

Biểu tượng Tên gen MOG một mình [gấp] $ CBD + MOG [gấp] $ Riêng CBD [gấp] $ ANOVA một chiều
Xcl1 Chemokine (C Motif) Ligand 1 62,7 ± 0,7 ## 17,9 ± 11,4 ** 1,6 ± 0,1 F (3,8) = 12,6, p  <0,01
IL12a Interleukin 12 4,3 ± 0,1 # 2,6 ± 0,3 * 0,8 ± 0,1 F (3,8) = 6,0, p  <0,05
Btla Bộ suy giảm tế bào lympho B và T 2,8 ± 0,4 ## 7,1 ± 0,4 *** 6,0 ± 0,5 ### F (3,8) = 60,9, p  <0,001
Dusp6 Phosphatase đặc hiệu kép 6 2,4 ± 0,4 3,3 ± 0,7 # 1,9 ± 0,3 F (3,8) = 3,3, p = 0,07
Irf4 Yếu tố điều hòa interferon 4 3,4 ± 0,6 ## 7,9 ± 0,5 *** 3,7 ± 0,3 ## F (3,8) = 43,3, p  <0,001
Lag3 & Gen kích hoạt tế bào bạch huyết 3 11,5 ± 0,3 ### 25,9 ± 2,3 *** 5,8 ± 1,5 * F (3,8) = 114, p  <0,001
IL10 & Interleukin 10 1,5 ± 0,3 3,4 ± 0,8 # 1,4 ± 0,3 F (3,11) = 3,6, p  = 0,05

$ Dữ liệu được biểu thị dưới dạng thay đổi lần so với điều khiển, không phải ô được kích thích (bằng 1). p  <0,05, ## p  <0,01, ### p  <0,01 so với tế bào T MOG đối chứng . * p  <0,05, ** p  <0,01, *** p  <0,001 so với các tế bào T MOG được kích thích bằng MOG-35-55 . & kết quả đã báo cáo trước đây [ 25 ]

Phân tích mạng lưới đồng biểu hiện gen có trọng số (WGCNA)

Chúng tôi đã áp dụng phân tích và phân nhóm WGCNA để bổ sung cho đặc điểm chức năng của những thay đổi trong biểu hiện gen do CBD gây ra trong T MOG được kích hoạt . Như đã đề cập trong Phương pháp, WGCNA phân cụm các bảng điểm liên quan đến chức năng thành các mô-đun theo cách không giám sát dựa trên mẫu biểu thức trên các mẫu. Kết quả của sự phân nhóm này có thể được xem như một biểu đồ dendrogram (Hình. 6a) trong đó mỗi nhánh tương ứng với một nhóm gen đồng biểu hiện (một mô-đun) được chỉ định một màu và sẽ được gọi bằng màu của nó trong phần còn lại của bản thảo.

Tệp bên ngoài chứa hình ảnh, hình minh họa, v.v. Tên đối tượng là 12974_2016_603_Fig6_HTML.jpg
Mở trong một cửa sổ riêng
Hình 6

Các mô-đun gen được phân nhóm WGCNA và mối tương quan của chúng với hiệu ứng CBD trong các tế bào T MOG được kích thích bằng MOG35-55 . Phân tích WGCNA xác định các mô-đun riêng biệt của các gen cùng biểu hiện. một biểu đồ Dendrogram cho thấy sự chồng chéo cấu trúc liên kết của các gen và mối quan hệ của chúng với các mô-đun được mã hóa màu bên dưới. b phân cụm các mô-đun kết quả. Khung màu cho biết các mô-đun chính có tương quan tích cực ( khung đỏ ) và tiêu cực ( khung xanh lục ) tương quan với hiệu ứng CBD trong T MOG được kích thích bằng MOG35-55 . c đồ thị mối quan hệ mô-đun-đặc điểm cho thấy mối tương quan của Spearman giữa các thành phần chính của mô-đun (hay còn gọi là mô-đun eigengenes [ME]; tronghàng mã màu ) và các phương pháp xử lý. Các giá trị hàng đầu trong mỗi hình vuông tượng trưng cho hệ số tương quan giữa ME và điều trị. Các giá trị dưới trong ngoặc là có liên quan p giá trị. Các mô-đun có tương quan cao với điều trị CBD + MOG35-55 được nhấn mạnh bằng cách sử dụng khung đen

Phân tích WGCNA đã nhóm các bảng điểm bị ảnh hưởng thành 36 mô-đun rời rạc (Hình. 6b). Tương quan Pearson của các mô-đun này cho thấy các mô-đun có tương quan đáng kể nhất với mỗi phương pháp điều trị (Hình. 6c). Các darkgrey mô-đun đã được chứng minh là có những tiêu cực đến hầu hết các tương quan ( r  = -0,5, p  = 0,05) và yellowgreen như tương quan tích cực nhất ( r  = 0,71, p  = 0,002) để kết hợp điều trị CBD + MOG35-55. Điều này trái ngược với hiệu ứng MOG35-55 trong đó mô-đun đồng biểu hiện gen darkgrey được công nhận là có tương quan thuận ( r  = 0,088, p  = 0,7) và mô-đun vàng xanh có tương quan nghịch ( r  = 0,35, p  = 0,2). Điều này chỉ ra rằng CBD đảo ngược các mô hình tương tác gen gây ra bởi sự kích thích MOG35-55 của TMOG . Để tìm kiếm cách giải thích chức năng của các liên kết này, chúng tôi đã chú thích các mô-đun tương quan CBD + MOG35-55 với các danh mục GO để làm nổi bật các chức năng sinh học chính được liên kết với hiệu ứng CBD trong các tế bào T MOG được kích thích . Các loại GO được xác định trong mô-đun darkgrey (chứa 94 gen Tệp bổ sung 1 : Bảng S2) dường như có liên quan chủ yếu với “ quá trình xử lý kháng nguyên và trình bày kháng nguyên peptit ngoại sinh thông qua MHC lớp II ” (GO: 0019882, GO: 0002504 GO: 0019886 ĐI: 0002495 ĐI: 0002478 ĐI: 0019884). Điều này có thể là do sự đại diện cao trong mô-đun này của các gen quy định quá trình xử lý kháng nguyên, ví dụ, H2-Ab1, CD9, Tmem66, CD74, Tlr2 và Fcrla. Các danh mục GO khác được xác định trong mô-đun darkgrey này bao gồm “ quá trình hệ thống miễn dịch ” (GO: 0002376), “ phản ứng phòng vệ ” (GO: 0006952), “ phản ứng viêm ” (GO: 0006954), “ quá trình trao đổi chất nitơ phản ứng ” (GO : 2001057), “ quy định sản xuất chemokine ” (GO: 0032642, tất cả trong thuật ngữ Quy trình sinh học), và “ ràng buộc ” (GO: 0005488; trong thuật ngữ Chức năng phân tử).

Các yellowgreen mô-đun (chứa 48 gen tập tin bổ sung 1 : Bảng S2) bao gồm gen như Ptpnm2, Slc30a1 và Btla. Phân tích GO đã điều chỉnh các thuật ngữ được chỉ định màu vàng xanh thành “ điều chỉnh các quá trình của hệ thống miễn dịch ” (GO: 0002682), “ phản ứng với kích thích ” (GO: 0048583), “ tín hiệu ” (GO: 0023051), “ giao tiếp tế bào ” (GO: 0010646) , “Sự kết dính tế bào ” (GO: 0030155), “ truyền tín hiệu ” (GO: 0009966; trong thuật ngữ Quy trình sinh học), “ hoạt động của yếu tố trao đổi guanyl-nucleotide ” (GO: 0005085; trong thuật ngữ Chức năng phân tử) và “ bên ngoài của màng sinh chất”(GO: 0009897; Điều khoản thành phần di động). Tóm lại, phân tích WGCNA đã chứng minh rằng tác dụng chính của CBD là hạn chế sự hoạt hóa MOG35-55 của T MOG chủ yếu bằng cách nhắm mục tiêu các quá trình điều chỉnh quá trình xử lý và trình bày kháng nguyên.

Đi đến:

Thảo luận

Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã mô tả các tác động của CBD lên hoạt động phiên mã của tế bào T MOG kích hoạt tế bào sinh não MOG35-55 của chuột , tế bào sau này được biết là gây ra các bệnh lý tự miễn dịch. Trước đây chúng tôi đã chỉ ra rằng CBD làm giảm sản xuất mRNA IL-17 và IL-6 và tiết protein trong MOG35-55 được kích thích bởi MOG được đồng nuôi cấy với APC đồng thời tăng tổng hợp mRNA IL-10 chống viêm [ 24 , 26 ]. Song song đó, chúng tôi chỉ ra rằng CBD điều chỉnh tiêu cực quá trình phosphoryl hóa STAT3 trong khi tăng cường hoạt động STAT5, các chất điều hòa tích cực và tiêu cực chính của sự biệt hóa Th17, tương ứng [ 36 ], khẳng định thêm tác động điều hòa của CBD đối với chức năng Th17 của tế bào T bộ nhớ [ 26]. Hồ sơ gen hiện tại cho thấy CBD nhắm mục tiêu vào một số lượng tương đối nhỏ gen (163) trong một nhóm lớn những gen bị ảnh hưởng đáng kể bởi kích thích MOG35-55 (đạt tới 1936 phiên mã). Phân tích tin sinh học được thực hiện trên các bản sao bị ảnh hưởng CBD này đã tập hợp chúng thành các con đường khác nhau và mạng lưới gen làm trung gian cho tác động của CBD lên các tế bào T bộ nhớ được kích hoạt MOG35-55. Phù hợp với các nghiên cứu trước đây của chúng tôi, hồ sơ gen này xác nhận rằng CBD ảnh hưởng đến các quá trình khác nhau kiểm soát “ sự biệt hóa Th17 ”, bao gồm “ tín hiệu IL-6 ” (một con đường thúc đẩy trí nhớ thế hệ Th17) và chống viêm “ tín hiệu IL10 ” (được biết là hạn chế Th17 chức năng và tự miễn dịch qua trung gian Th17 [ 25 , 37 ]).

CBD điều hòa phiên mã 81 gen và điều hòa giảm 82 gen trong T MOG được kích thích bởi MOG35-55 . Ví dụ, CBD được phát hiện làm giảm mức mRNA được điều chỉnh MOG35-55 của các chất trung gian tiền viêm khác nhau bao gồm interleukin ( Il3 , Il1b và Il12a ), chemokine ( Xcl1 và Cxcl9 ) và các thụ thể ( Cxcr1 , Ifngr1 , Gpr83 ), các phân tử được biết đến tham gia vào quá trình tạo và chức năng Th17 [ 38 – 40 ]. Ngoài ra, CBD đã điều chỉnh các yếu tố của các tầng tín hiệu khác nhau, bao gồm các thành viên của siêu họ TNF (ví dụ: Tnfsf11 ,Tnfrsf18 ), các phân tử làm trung gian kết dính tế bào (ví dụ: Amica1 ) tăng trưởng, cấu trúc và chuyển hóa (ví dụ: Cdk5r1 , Tubb2d , Dgat1 ). Ảnh hưởng của CBD đối với các thành viên siêu họ TNF được thấy là rất đa dạng. Điều này không có gì đáng ngạc nhiên vì siêu họ TNF bao gồm một số lượng lớn các phân tử tham gia vào nhiều quá trình tế bào bao gồm viêm, tăng trưởng tế bào, chu kỳ tế bào, biệt hóa, chuyển hóa và sản xuất cytokine [ 41 ]. MRNA của yếu tố phiên mã bộ điều biến phần tử đáp ứng cAMP (CREM) cũng bị CBD ức chế đáng kể trong T MOG sinh não được kích hoạttế bào. Hoạt động CREM đã được chứng minh là kiểm soát sự biểu hiện IL-2 và IL-17 trong quá trình cam kết và phân phối dòng dõi CD4 [ 42 ]. Thật vậy, các tế bào T tự miễn dịch của con người được chứng minh là có biểu hiện tăng CREM làm tăng giải phóng IL-17 và khả năng tự miễn dịch của chúng ( ví dụ , trong bệnh lupus ban đỏ hệ thống và các bệnh lý giống MS [ 43 , 44 ]). Do đó, sự giảm Crem mRNA được tìm thấy ở đây có thể đóng vai trò quan trọng trong việc ức chế hoạt động giống Th17 của tế bào T MOG do CBD gây ra . Ức chế tuyến yên này CREM mRNA của CBD dường như không được trung gian quacác thụ thể cannabinoid CB1 và CB2, cả hai đều được biết là có ảnh hưởng đến hoạt động của adenylyl cyclase và sự hình thành cAMP [ 45 , 46 ]. Điều này là do CBD được chứng minh là có ái lực không đáng kể đối với các thụ thể này [ 47 ]. Hơn nữa, trước đây chúng tôi đã chỉ ra rằng tác động của CBD lên T MOG không liên quan đến các thụ thể này [ 12 , 24 ].

Một số bản sao do MOG35-55 gây ra được bảo tồn ở mức cao hoặc thậm chí được điều chỉnh thêm khi có CBD. Yếu tố phiên mã Egr2 là một trong những đại diện được điều chỉnh cao nhất của nhóm này cùng với một số cytokine ( Csf2 , Ifng , Tnf ), chemokine ( Ccl3 , Ccl4 , Cxcl10 ) và glycoprotein điều hòa ( Sema7a ). Mô hình biểu hiện gen này có thể cho thấy sự thúc đẩy bởi CBD của các điều kiện dung nạp dẫn đến sự cạn kiệt của tế bào T (năng lượng) và do đó dẫn đến vô hiệu hóa chức năng của tế bào T [ 48]. Thật vậy, EGR2 là một dấu hiệu năng lượng tế bào T đã được thừa nhận, cảm ứng sẽ kích hoạt chương trình di truyền thúc đẩy quá trình bắt giữ chu kỳ tế bào, cuối cùng làm giảm các phản ứng miễn dịch [ 49 , 50 ] bao gồm sản xuất IL-17 [ 51 , 52 ]. Thật vậy, gần đây chúng tôi đã chỉ ra rằng CBD tạo ra năng lượng phụ thuộc Egr2 trong các tế bào T gây não và CBD tăng cường biểu hiện của một số gen đặc trưng năng lượng khác bao gồm Il10 và Lag3 [ 26 ].

Việc sản xuất và bài tiết mRNA Ifng được điều chỉnh MOG35-55 không bị ảnh hưởng bởi CBD trong các tế bào MOG T được kích thích [ 24 ]. Kết quả này được tái tạo bằng phân tích microarray hiện tại cho thấy không có ảnh hưởng của CBD lên yếu tố phiên mã ngược dòng IFNγ Tbx21 mRNA. Mặt khác, các kết quả hiện tại cho thấy CBD có tác dụng tăng cường mạnh mẽ đối với một số bảng điểm phụ thuộc IFN bao gồm Irf4 , Ifit3 , Rsad2 / Viperin và Mx2 . Interferon loại I (IFN-α và -β) và loại II (IFN-γ) được biết là trung gian cho các đáp ứng miễn dịch bẩm sinh và ức chế sự gia tăng của các tế bào nhiễm vi rút [ 53]. IFNs có tác dụng chống tăng sinh và điều hòa miễn dịch và các tế bào biểu hiện IFNγ được chứng minh là chống lại hoạt động của Th17 [ 54 ]. Sự thay đổi trong mô hình gen IFN-kích thích (kể cả trong iFit , MX2 , Cxcl10 ) và / hoặc trong Jak hoạt động / STAT, một con đường IFN-phụ thuộc chủ yếu, nguyên nhân thất bại trong sự khoan dung miễn dịch dẫn đến T bệnh lý tự miễn dịch trung gian tế bào ( ví dụ , gõ Tôi tiểu đường) [ 55 ]. Do đó, chúng tôi giả định rằng các con đường kiểm soát IFN tăng cường CBD có thể góp phần vào tác dụng chống tăng sinh CBD trong các tế bào T bộ nhớ được kích hoạt, như chúng tôi đã quan sát trước đây [ 12 ].

Yếu tố điều hòa interferon 4 (IRF4, một yếu tố hạt nhân đặc hiệu của tế bào lympho) được chứng minh là yếu tố thúc đẩy cốt lõi của các gen phụ thuộc IFN khác như Rsad2 và Ifit3 [ 56 ]. IRF4 được báo cáo là làm trung gian cho sự biệt hóa của các tế bào T CD4 + ngây thơ thành các dòng T trợ giúp khác nhau [ 57 ] IRF4 hiệp đồng mạnh mẽ với tín hiệu NFAT để tăng cường hoạt động thúc đẩy của cytokine IL-4 chống viêm [ 58 ]. Thật vậy, trong tay chúng tôi Nfatc1 mRNA, một phần tử của trục truyền tín hiệu NFAT, đã được điều chỉnh bởi CBD.

Sự phiên mã của một số gen đã bị điều hòa bởi kích thích MOG35-55. Nhóm gen này bao gồm các thụ thể IL-17 ( Il17re biến thể 1 và 2, Il17rc ). Điều thú vị là CBD đã không đảo ngược điều hòa giảm mRNA Il17r này cho thấy CBD không can thiệp vào cơ chế phản hồi tiêu cực nội tại hạn chế hoạt động của các tế bào T bộ nhớ.

Sự hoạt hóa tế bào T do kháng nguyên xảy ra sau sự trình bày peptit bởi các phân tử phức hợp tương thích mô chính lớp II (MHCII) trên tế bào APC. Một số phân tử điều hòa tiêu cực các tương tác APC / T này [ 59 ]. Nghiên cứu của chúng tôi cho thấy CBD là chất cảm ứng mạnh mẽ các chất điều hòa âm tính của tương tác APC / T vì CBD làm tăng mức mRNA của: Chất suy giảm tế bào lympho B và T ( Btla / Cd272 ); gen kích hoạt tế bào lympho 3 ( Lag3 / Cd223 ); cụm biệt hóa 69 ( Cd69 ) và bộ tiếp hợp xuyên màng liên kết với thụ thể tế bào T 1 / Phân tử tương tác với thụ thể tế bào T ( Trat1/ TRIM). Các phân tử này là thành viên của một nhóm rộng, có liên quan về cấu trúc của các thụ thể immunoglobulin được tìm thấy để đóng vai trò là dấu hiệu của các kiểu hình điều hòa tế bào T cảm ứng khác nhau liên quan đến việc ức chế Th17 và cải thiện các bệnh lý giống MS [ 59 – 62 ]. Ví dụ, LAG3 là một chất tương đồng của thụ thể CD4, bằng cách can thiệp vào MHCII trên APC khi tiếp xúc với kháng nguyên sẽ ức chế chức năng và sự mở rộng của các tế bào T bộ nhớ [ 63 ] làm giảm IL-17 và tăng tiết IL-10, theo cách này ngăn ngừa tự miễn dịch ở chuột [ 64 , 65 ]. Chuột thiếu thụ thể xuyên màng CD69 sẽ phát triển các dạng bệnh lý tự miễn dịch trầm trọng hơn bao gồm viêm khớp, viêm da tiếp xúc, hen suyễn dị ứng và viêm cơ tim tự miễn [66 ]. Thật vậy, các tế bào T thiếu hụt CD69 chứng tỏ sự biệt hóa tăng lên thành các tế bào Th17, giải phóng IL-17 cao hơn cũng như các hoạt động gia tăng trên con đường Jak3 / Stat5 và RORγt [ 67 ] (Martin 2010). Tương tự, thắt BTLA với phối tử của nó, chất trung gian xâm nhập virus herpes (HVEM / TNFRSF14), đã được chứng minh là làm giảm sự tăng sinh tế bào T [ 68 , 69 ] và thúc đẩy năng lượng [ 70 ]. Con đường BTLA / HVEM chức năng duy trì khả năng dung nạp miễn dịch và ngăn ngừa tự miễn dịch (để xem xét lại, xem [ 71 ] và thiếu hụt BTLA ở chuột dẫn đến viêm khớp dạng thấp qua trung gian tế bào T, thâm nhiễm tế bào lympho, các bệnh giống viêm gan tự miễn, và EAE [ 72 – 74]. CTLA-4 (CD152) là một thụ thể ức chế mà ở trạng thái không hoạt động, nó nằm trong nội bào và theo nhu cầu được vận chuyển bởi protein TRAT1 / TRIM (được điều chỉnh bởi CBD) đến màng [ 75 ]. CTLA-4 cạnh tranh tiêu cực trên tế bào T với CD28, một phân tử tế bào T đồng kích thích, liên kết với các chất đồng hoạt hóa CD80 và CD86 trên tế bào APC [ 76 , 77 ]. Sự gia tăng biểu hiện CTLA4 phụ thuộc TRAT1 / TRIM dẫn đến việc ức chế sự mở rộng tế bào T sinh não và sự phát triển EAE [ 78 ]. Đồng ý với điều này, biểu hiện CTLA-4 suy yếu trên tế bào T được tìm thấy có liên quan đến việc tăng giải phóng IL-17 và EAE nghiêm trọng hơn [ 79]. Hơn nữa, những con chuột thiếu CTLA-4 biểu hiện kiểu hình tự miễn dịch với sự phá hủy cơ quan qua trung gian tế bào T [ 80 – 82 ] Do đó, sự điều hòa CBD của những chất ức chế mạnh mẽ này của giao tiếp APC / T sẽ phát huy tác dụng điều hòa miễn dịch mạnh mẽ trong MOG35-55 T MOG hoạt hóa dẫn đến hoạt động bị ức chế của chúng. Thật vậy, phân tích WGCNA bổ sung đã xác nhận vai trò ức chế của CBD trong các quá trình liên quan đến việc trình bày và xử lý kháng nguyên và tương tác APC / T MOG . Hơn nữa, những quan sát này phù hợp với báo cáo trước đây của chúng tôi cho thấy CBD làm giảm sự hoạt hóa của các tế bào B (APC chính ở ngoại vi) được ủ với T MOG cũng như biểu hiện MHCII trên các tế bào này [ 26].

Các loại oxy phản ứng được tạo ra chủ yếu bởi các đại thực bào và tế bào thần kinh bị tổn thương, làm tăng phản ứng miễn dịch và kích hoạt tế bào T, lan truyền quá trình khử men và thoái hóa thần kinh [ 83 ]. Hồ sơ gen hiện tại liên kết các hiệu ứng CBD với yếu tố nhân-erythroid 2 liên quan đến yếu tố 2 (Nfe2l2 / Nrf2)-chương trình di truyền chống oxy hóa đã được kiểm chứng, được biết là có tác dụng điều hòa miễn dịch [ 84 , 85 ]. Kết quả của chúng tôi cho thấy CBD tăng cường sự biểu hiện của các gen mục tiêu Nrf2 bao gồm Heme oxygenase-1 (Hmox-1 mã hóa protein HO-1) và metallothioneins ( Mt1 và Mt2). Thật vậy, chuột Mt (- / -) cho thấy sự thâm nhập của đại thực bào và tế bào lympho T vào thần kinh trung ương cũng như tăng giải phóng cytokine, stress oxy hóa và tổn thương sợi trục so với các đồng loại EAE kiểu hoang dã của chúng [ 86 ]. HO-1 được chứng minh là làm giảm các phản ứng viêm, ví dụ , thông qua cảm ứng cytokine IL10 chống viêm và điều chỉnh con đường Jak / STAT [ 87 ]. Thật vậy, cảm ứng dược lý hoặc di truyền của các gen chống oxy hóa phụ thuộc Nrf2 (tức là, Hmox1 , Mt1 và Mt2 ) ở chuột EAE đã dẫn đến giảm mức IL-17 và giảm mức độ nghiêm trọng của EAE [ 88]. Hơn nữa, chuột Hmox1 – / – C57BL / 6 phát triển chứng tê liệt giống EAE và khử men thần kinh trung ương tăng cường trong khi sự phục hồi HO-1 làm giảm sự tiến triển của EAE và tái phát [ 89 ]. Điều thú vị là tác dụng bảo vệ này của HO-1 có liên quan đến việc ức chế sự biểu hiện MHCII của APC thông qua cơ chế liên quan đến carbon monoxide, một sản phẩm chống oxy hóa của hoạt động HO-1. Do đó, sự cảm ứng CBD của các gen chống oxy hóa phụ thuộc Nfe2l2 / Nrf2 có thể là một trong những cơ chế chính thúc đẩy tác dụng chống viêm của cannabinoid này trong tế bào T MOG và EAE. Sự điều hòa CBD tương tự của các gen chống oxy hóa đã được chúng tôi báo cáo trong các tế bào vi mô được kích thích bằng LPS và tĩnh lặng [ 30 , 90]. Những phát hiện này cho thấy điều hòa miễn dịch phụ thuộc Nrf2 có thể là một tính năng quan trọng của cannabinoid này góp phần vào tác dụng chống viêm của nó. Tuy nhiên, chúng ta không thể loại trừ rằng CBD cũng ảnh hưởng đến một số con đường khác, ví dụ, các thụ thể đối với A2A cũng như các dimer của CB2 / 5HT1A [ 91 ]. Ngoài ra, CBD đã được chứng minh là làm tăng mức nội tiết tố, được biết đến để điều chỉnh các chức năng miễn dịch [ 92 ], do đó nó có thể gián tiếp thực hiện các hoạt động điều hòa miễn dịch trên tế bào T thông qua các thụ thể CB2, trước đây đã được đề xuất để điều chỉnh quá trình tự miễn dịch qua trung gian tế bào T. [ 93 ].

Đi đến:

Kết luận

Tóm lại, việc lập hồ sơ biểu hiện gen sau đó là các phân tích tin sinh học chứng minh rằng CBD thực hiện tác dụng điều hòa miễn dịch của nó trong các tế bào T MOG bộ nhớ được kích hoạt thông qua một số cơ chế: (a) bằng cách ngăn chặn phiên mã tiền viêm và ức chế các con đường có lợi cho chức năng và biệt hóa Th17, (b) bằng cách thúc đẩy a thiết lập phiên mã dẫn đến cạn kiệt / dung nạp tế bào T, (c) bằng cách tăng cường chương trình chống tăng sinh phụ thuộc IFN, (d) bằng cách tăng cường cơ chế đồng ức chế tế bào T nội tại cản trở giao tiếp APC / T và trình bày kháng nguyên hiệu quả, và (e) bằng cách tạo ra chất chống oxy hóa giải quyết tình trạng viêm.

Đi đến:

Các từ viết tắt

Tế bào trình diện kháng nguyên APC , CBD cannabidiol, viêm não tủy tự miễn thực nghiệm EAE , bản thể học gen GO , IFN interferon, IL interleukin, phân tích con đường khéo léo IPA , MOG35-55 myelin oligodendrocyte glycoprotein 35-55, MOG MOG35-55 tế bào T đặc hiệu, WGCNA phân tích mạng đồng biểu hiện gen có trọng số

Đi đến:

Sự nhìn nhận

Dòng tế bào T MOG được cung cấp bởi phòng thí nghiệm của Giáo sư Avraham Ben-Nun từ Khoa Miễn dịch học tại Viện Khoa học Weizmann, Rehovot, Israel.

Kinh phí

Công trình này được hỗ trợ bởi Quỹ Nghiên cứu Y khoa Tiến sĩ Miriam và Sheldon G. Adelson. AJ được hỗ trợ bởi Bộ Khoa học hấp thụ Israel. Chúng tôi ghi nhận sự hỗ trợ của Trung tâm Tin học NINDS về Di truyền thần kinh và Tế bào thần kinh (P30 NS062691).

Sự sẵn có của dữ liệu và vật liệu

Không có dữ liệu, phần mềm, cơ sở dữ liệu, ứng dụng / công cụ nào có sẵn ngoài các báo cáo trong nghiên cứu này. Dữ liệu hỗ trợ các kết luận được trình bày trong bản thảo.

Tác giả đóng góp

EK đã thiết kế và thực hiện các thí nghiệm, thực hiện phân tích IPA và viết bài báo. FG và GC đã thực hiện các thí nghiệm microarray và phân tích dữ liệu. AJ thực hiện tách chiết mRNA và phân tích qPCR về biểu hiện gen. NK và EK đã cung cấp bí quyết thiết lập và nuôi cấy các dòng tế bào T MOG . EK, AJ, FG, GC, NK và ZV đã đóng góp vào các cuộc thảo luận về nội dung bài báo, đồng thời xem xét và chỉnh sửa bản thảo trước khi gửi.

Lợi ích cạnh tranh

Các tác giả tuyên bố rằng họ không có lợi ích cạnh tranh.

Đồng ý xuất bản

Không áp dụng.

Phê duyệt đạo đức và đồng ý tham gia

Tất cả những con chuột được sử dụng trong các nghiên cứu này đều được duy trì theo hướng dẫn của Ủy ban Sử dụng và Chăm sóc Động vật của Tổ chức (IACUC). Các thí nghiệm trên động vật đã được Viện Khoa học Weizmann và IACUC của Đại học Tel Aviv chấp thuận và thực hiện.

 

In this article